Question

【題目】Rag2基因缺失小鼠不能產生成熟的淋巴細胞。科研人員利用胚胎干細胞（ES細胞）對Rag2基因缺失小鼠進行基因治療，簡易操作流程如圖所示。回答下列問題：

（1）Rag2基因缺失小鼠體內不存在特異性免疫，理由是_______________。

（2）圖中③過程所用培養液成分一般都比較復雜，除了______以外，還要要加維生素、激素、氨基酸、核苷酸等營養成分，以及動物血清等物質。添加動物血清的原因是_______。

（3）圖中②過程卵母細胞需除去________，才能與上皮細胞結合成重組細胞。

（4）圖中⑤過程導入到ES細胞的是含有Rag2基因的___________。

（5）ES細胞具有胚胎細胞的特性，在形態和功能上的特點分別是________；圖中⑥過程誘導ES細胞定向分化成造血干細胞時，需向培養液中添加__________。

（6）經⑦過程處理后，為檢測Rag2基因是否成功表達，可提取該小鼠骨髓細胞的蛋白質，并用抗Rag2蛋白的抗體進行雜交實驗，理由是_______________。

Answer 1

【答案】 該小鼠不能產生成熟的淋巴細胞，而特異性免疫需要成熟淋巴細胞的參與 無機鹽和有機鹽類 動物血清的營養成分比較全，能彌補人工培養基的不足 細胞核 表達載體 體積小、細胞核大、核仁明顯；具有發育的全能性 分化誘導因子 Rag2基因表達的蛋白質能與抗Rag2蛋白的抗體特異性結合

【解析】解答本題需要學生掌握以下知識點：1、動物核移植的概念：將動物的一個細胞的細胞核移入一個去掉細胞核的卵母細胞中，使其重組并發育成一個新的胚胎，這個新的胚胎最終發育為動物個體。2、胚胎干細胞簡稱ES或EK細胞，來源于早期胚胎或原始性腺（即囊胚期的內細胞團）。3、在基因工程中，目的基因和質粒需要用同種限制酶進行切割，形成相同的黏性末端，再用DNA連接酶連接成重組質粒。4、目的基因分子水平上的檢測：。①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA--分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質--抗原-抗體雜交技術。

（1）據題干信息可知，Rag2基因缺失小鼠不能產生成熟的淋巴細胞，而特異性免疫需要成熟淋巴細胞的參與，因此Rag2基因缺失小鼠體內不存在特異性免疫。

（2）③表示早期胚胎培養過程，早期胚胎培養所需的培養液成分一般都比較復雜，除了無機鹽、有機鹽類以外，還要添加維生素、激素、氨基酸、核苷酸、動物血清等，添加動物血清的原因是動物血清的營養成分比較全，能彌補人工培養基的不足。

（3）核移植是指將體細胞核移植到去核卵母細胞中，因此②核移植過程中，在核移植前應去除卵母細胞的細胞核，才能與上皮細胞結合成重組細胞。

（4）目的基因不能直接導入受體細胞，直接導入目的基因無法表達，需要構建基因表達載體后才能導入，因此圖中⑤過程導入到ES細胞的是含有Rag2基因的表達載體。

（5）胚胎干細胞簡稱ES或EK細胞，來源于早期胚胎或原始性腺（即囊胚期的內細胞團）。具有胚胎細胞的特性，體積較小，細胞核大，核仁明顯；在功能上，具有發育的全能性，可分化為成年動物任何一種組織細胞。圖中⑥過程誘導ES細胞定向分化成造血干細胞時，需向培養液中添加分化誘導因子。

（6). Rag2基因表達的蛋白質能與抗Rag2蛋白的抗體特異性結合，所以提取小鼠骨髓細胞的蛋白質進行抗原－抗體雜交。