Question

【題目】重組人血白蛋白和干擾素α-2b（rHSA，IFNα-2b）是血液制品俗稱“生命制品”的一種替代品，是臨床非常珍貴的藥物，目前利用基因工程，以酵母菌為工程菌生產(chǎn)，具有純度高，生產(chǎn)效率高等特點。其實驗流程如甲圖，乙圖是pHIL-D2質粒（載體）的圖譜，據(jù)圖回答：

（1）RT-PCR是利用人血白細胞中的mRNA逆轉錄獲取人IFNα-2b 的cDNA，以此cDNA為模板，擴增人IFNα-2b基因，那么RT-PCR要用到的酶是__________________。在獲得rHSA/IFNα-2b重組基因時，要用到限制酶，大多數(shù)限制酶的識別序列由____個核苷酸組成。

（2）甲圖中，用酵母菌做表達工程菌而不用大腸桿菌做工程菌，推測可能的原因是_______________________________________________________________________。

（3）本實驗的表達載體如乙圖，除了目的基因外，還必須有啟動子和終止子，啟動子的本質是__________________，其功能是____________________________________。

（4）乙圖中Ampinicillin表示氨芐青霉素抗性基因，其作用是______________________。

（5）基因工程最后一步是目的基因的檢測與鑒定，請說出分子水平檢測的物質有________________________________________________________________________。

Answer 1

【答案】 逆轉錄酶和Taq酶（熱穩(wěn)定性的DNA連接酶） 6 酵母菌是真核生物，生產(chǎn)的產(chǎn)物（重組人血白蛋白和干擾素α-2b）活性高，產(chǎn)量高 一段有特殊結構的DNA片段 促進目的基因轉錄出mRNA 供重組DNA的鑒定與選擇 目的基因、轉錄出的mRNA、翻譯的產(chǎn)物（蛋白質）

【解析】本題考查基因工程的操作過程，意在考查學生對基因工程操作過程知識點的識記和理解。

（1）RT-PCR又稱逆轉錄PCR，是利用一條RNA鏈逆轉錄成為互補DNA，再以此為模板通過PCR進行DNA擴增。此過程需要的酶是逆轉錄酶和Taq酶。大多數(shù)限制酶的識別序列由6個核苷酸組成。

（2）由于大腸桿菌細胞不具備內(nèi)質網(wǎng)和高爾基體，從而使初始合成的蛋白質不能進一步被加工、包裝和轉運，而酵母菌是真核生物，生產(chǎn)的產(chǎn)物（重組人血白蛋白和干擾素α-2b）活性高，產(chǎn)量高，因而用大腸桿菌做成的工程菌不如用酵母菌做成的工程菌效果好。

（3）啟動子是基因的一個組成部分，其化學本質是DNA的部分序列(存在于基因編碼區(qū)的上游，控制基因轉錄的起始時間和基因表達的程度，促進目的基因轉錄出mRNA。

（4）氨芐青霉素抗性基因屬于標記基因，在基因工程意義上來說，它是重組DNA載體的重要標記，通常用來檢驗轉化成功與否，可供重組DNA的鑒定與選擇。

（5）基因工程最后一步是目的基因的檢測與鑒定，分子水平檢測的有：1.對標記基因的檢測，通常用DNA分子雜交技術，來檢驗標記基因（目的基因）是否成功的導入受體細胞。2.RNA分子雜交技術，來看目的基因導入后是否成功轉錄出信使RNA。3.用抗原-抗體檢驗，來驗證導入基因是否成功表達出蛋白質。

[點睛]：本題以基因工程應用為背景，考查學生分析材料信息解答問題的能力，對此類題型的解題技巧：1. 認真閱讀材料，分析其中的關鍵語句，充分聯(lián)系教材，找到與教材的銜接點；2. 給合題文要求，對于聯(lián)系教材的有關原理、概念等，盡可能用教材語言規(guī)范答題。