Question

【題目】回答下列（一）、（二）小題：

（一）科研人員從山西老陳醋的醋醅中分離出產酸能力強的醋桿菌，回答下列相關問題：

（1）已知溴甲酚紫 pH 變色范圍是5.2（黃色）～6.8（紫色）。在分離醋桿菌用的培養基中加入溴甲酚紫作為_______以鑒別產醋桿菌。配制培養基時，加入經 _________滅菌的乙醇，乙醇的主要作用是___________。

（2）三角瓶、試管、培養皿等用牛皮紙或報紙包扎好后置于高壓蒸汽滅菌鍋中滅菌，要注意滅菌物品不能放太滿太擠，要留出空隙以利于______。滅菌后，通常將實驗用具放入60℃～80℃的烘箱中烘干，目的是_________。

（3）取 10g 山西老陳醋的醋醅等梯度稀釋，用 ___________取 10 -3、10-4、10 -5稀釋度的樣品稀釋液0．1mL 涂布于平板分離培養基上，30℃倒置培養48h。若要篩選產酸能力強的菌種，需挑選若干個 ___________比值大的菌落，分別用________擴增，然后離心檢測培養液中醋酸含量。

（二）胚胎干細胞（ES細胞）介導法的主要操作過程是：將外源基因導入胚胎干細胞，然后將轉基因的胚胎干細胞注射于受體動物胚胎后可參與宿主的胚胎構成。如圖是利用胚胎干細胞介導法培育出熒光小鼠的過程。回答下列問題：

（1）從水母中獲取綠色熒光蛋白基因 有多種方法。將水母的全部基因用 _______切成片段，插入到載體分子中，并將所得的 _______轉入大腸桿菌，通過_________使目的基因擴增，再用某種探針釣取目的基因。

（2）③過程常用________方法，④過程中飼養層的作用是_______，⑤過程注入的胚胎干細胞具有______ 特點，從而可分化成個體的各種組織和器官。在進行⑥之前，需對受體母鼠進行_______處理。

（3）關于受體母鼠妊娠產下的子代小鼠的特點，下列敘述正確的是_____________。

A．各細胞都有綠色熒光蛋白基因，所以全身每個細胞都有綠色熒光蛋白產生

B．各細胞都有綠色熒光蛋白基因，但只有部分細胞有綠色熒光蛋白產生

C．不是所有細胞都有綠色熒光蛋白基因，所以只有部分細胞有綠色熒光蛋白產生

D．該小鼠產生的配子中含綠色熒光蛋白基因的概率為1/2

Answer 1

【答案】（酸堿）指示劑 過濾滅菌/G6 玻璃砂漏斗 作為碳源 蒸汽流通 除去滅菌時的水分 取樣器 黃色環帶直徑與菌落直徑 液體培養基 限制性核酸內切酶 重組載體/重組 DNA/重組質粒 大腸桿菌的繁殖 顯微注射的 促進胚胎干細胞的分裂，抑制胚胎干細胞的分化 發育全能性 同期發情 C

【解析】

據圖分析，目的基因是綠色熒光蛋白基因，①表示獲取目的基因，②表示構建基因表達載體（重組質粒），③表示將目的基因導入受體細胞（胚胎干細胞），④表示動物細胞（胚胎干細胞）培養，⑤表示將胚胎干細胞注入囊胚，⑥表示胚胎移植。

（一）（1）根據題意分析，溴甲酚紫在不同的pH條件下會變色，因此在分離醋桿菌用的培養基中加入溴甲酚紫作為（酸堿）指示劑以鑒別產醋桿菌；加入的乙醇可以為醋酸菌提供碳源，乙醇加入前需要經過過濾滅菌。

（2）高壓蒸汽滅菌時，滅菌鍋中的滅菌物品不能放太滿太擠，要留出空隙以利于蒸汽流通；滅菌后，通常將實驗用具放入60℃～80℃的烘箱中烘干，以除去滅菌時的水分。

（3）應該用取樣器取稀釋度的樣品稀釋液；溴甲酚紫在酸性條件下變黃，所以若要篩選產酸能力強的菌種，需挑選若干個黃色環帶直徑與菌落直徑比值大的菌落，分別用液體培養基擴增，然后離心檢測培養液中醋酸含量。

（二）（1）將水母的全部基因切成片段需要用限制酶（限制性核酸內切酶），然后插入到載體分子中形成重組載體（重組質粒），再轉入大腸桿菌，通過大腸桿菌的繁殖使目的基因擴增。

（2）③表示將目的基因導入受體細胞（胚胎干細胞），常用顯微注射法；④表示胚胎干細胞的培養過程，該過程中飼養層的作用是促進胚胎干細胞的分裂，抑制胚胎干細胞的分化；⑤過程注入的胚胎干細胞具有發育全能性，從而可分化成個體的各種組織和器官；⑥表示胚胎移植，在胚胎移植之前，需對受體母鼠進行同期發情處理。

（3）據圖分析可知，將含有綠色熒光蛋白基因的胚胎干細胞注入囊胚，而囊胚中的原有細胞是不含綠色熒光蛋白基因的，因此胚胎移植后產生的小鼠并不是所有細胞都有綠色熒光蛋白基因，所以只有部分細胞有綠色熒光蛋白產生。

故選C。