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【題目】下表為某種微生物培養基的配方。

成分

KH2PO4

Na2HPO4

MgSO47H2O

葡萄糖

尿素

瓊脂

含量

14g

21g

02g

100g

10g

150g

請回答相關問題:

1)培養基中的KH2PO4Na2HPO4的作用有____(答出兩點即可)。

2)依物理性質,該培養基屬于____培養基,依功能看,該培養基屬____培養基。

3)分解尿素的細菌才能在該培養基上生長,原因是____

4)甲、乙兩名同學分別用不同方法對某一土壤樣品中的尿素分解菌進行分離純化,結果如下圖。

①甲同學在平板劃線操作的第一步之前、每次劃線之前、劃線結束時都要灼燒接種環,請問每次劃線之前灼燒接種環的原因是____

②乙同學采用的方法是 ___,接種時操作的失誤可能是 ___

【答案】提供無機營養、維持pH穩定 固體 選擇 能合成脲酶 殺死上次劃線結束后,接種環上殘留的菌種,使下一次劃線時,接種環上的菌種直接來源于上次劃線的末端 稀釋涂布平板法 涂布不均勻

【解析】

1、微生物常見的接種的方法

①平板劃線法:將已經熔化的培養基倒入培養皿制成平板,接種,劃線,在恒溫箱里培養。在線的開始部分,微生物往往連在一起生長,隨著線的延伸,菌數逐漸減少,最后可能形成單個菌落。

②稀釋涂布平板法:將待分離的菌液經過大量稀釋后,均勻涂布在培養皿表面,經培養后可形成單個菌落。

2、分解尿素的細菌可以合成的脲酶將尿素分解成氨和二氧化碳。

3、培養基的種類:按物理性質可以分為固體培養基和液體培養基,按功能可以分為選擇培養基和鑒別培養基。

1KH2PO4Na2HPO4可以為微生物生長提供無機營養并維持pH穩定。

2)該培養基含有瓊脂,所以從物理性質上屬于固體培養基;從功能上來看,該培養基以尿素作為唯一氮源,所以是選擇培養基。

3)該培養基以尿素作為唯一氮源,而分解尿素的細菌可以產生脲酶將尿素分解,所以可以在該培養基上生長。

4)①甲同學是用的平板劃線法,每次劃線之前灼燒接種環的目的是殺死上次劃線結束后,接種環上殘留的菌種,使下一次劃線時,接種環上的菌種直接來源于上次劃線的末端。

②乙同學采用的接種方法稀釋涂布平板法,從菌落生長情況來看,菌落在平板上分布不均勻,可能的原因是涂布不均勻。

練習冊系列答案
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α鏈:5'-T C A C T C G A G A C C A T G C A G A T C C C A C A G G C G C C C-3'

β鏈:5'-C T C G A A T T C T C A G A G G G G C C A A G A G C A G T G-3'

1

1)首先提取細胞中的mRNA反轉錄生成____________________作為模板;設計含有不同的限制酶切點的αβ序列為引物,通過____________________技術擴增目的基因。

2)選用圖1中的兩種名稱分別為____________________的限制酶將“pIRES2-EGFP質粒”載體進行雙切,再用DNA連接酶將其與目的基因拼接,構建表達載體。該表達載體的組成,除了目的基因、標記基因抗卡那霉素基因外,還必須具有____________________等。

3)而后一定溫度下,與經過處理的感受態大腸桿菌混合培養在含有_____________培養基中,可篩選出已經完成轉化的大腸桿菌,繼續培養該種大腸桿菌以擴增重組DNA

4)將擴增后的“pIRES2-EGFP載體/PD-1重組DNA”轉入可高度表達外源基因的原代293T細胞。一段時間后,為確定PD-1基因是否表達,檢測細胞膜表面是否具有____________________。為判斷其是否具有生物學活性和功能,則可裂解293T細胞,提取該物質看能否與____________________發生結合,從而阻斷“PD-1PDL-1信號通路”。研究中還會有一步驟,只將“pIRES2-EGFP載體”轉入293T細胞,其目的是_________________________

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