Question

【題目】菊花是重要觀賞花卉，為增加菊花花色類型，某科研小組從植物A的基因文庫中選出花色基因C（圖1），并將其與質粒（圖2）重組，再借助農桿菌導入菊花中。請回答下列問題：

（1）利用PCR技術可獲贈花色基因C，擴增前需根據花色基因C的一段核苷酸序列合成_____________，便于擴增時熱穩定DNA聚合酶延伸DNA子鏈。

（2）構建基因表達載體時，需用EcoRⅠ分別處理C基因和質粒而不用BamHⅠ的理由是_____________；當C基因和質粒連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是_____________。

（3）用含C基因的農桿菌侵染菊花愈傷組織時，需在培養基中添加酚類物質，其目的是_____________；C基因的遺傳特性能在菊花體內維持和表達的關鍵是_____________；為篩選出成功轉化的菊花細胞，應在篩選培養基中添加_____________。

（4）經檢測部分菊花植株的基因組中已有C基因，但沒有發現基因C對應花色，為分析原因，可從分子水平上采用_____________技術檢測C基因是否轉錄。

Answer 1

【答案】 引物（一對引物） EcoRⅠ可切割C基因兩端和質粒，產生相同黏性末端便于構建重組質粒，而C基因兩端無BamHⅠ的識別序列 磷酸二酯鍵 吸引農桿菌移向菊花細胞，有利于C基因成功轉化 目的基因插入到了菊花細胞的染色體DNA上 潮霉素 分子雜交

【解析】試題分析：據圖分析，圖1中C基因（目的基因）兩側的限制酶是EcoRⅠ；圖2表示質粒，含有標記基因、啟動子、終止子、EcoRⅠ和BamHⅠ限制酶切割位點。

（1）利用PCR技術擴增C基因（目的基因）時，首先要根據目的基因的核苷酸序列合成一對引物，便于擴增時熱穩定DNA聚合酶延伸DNA子鏈。

（2）根據以上分析可知，EcoRⅠ可切割C基因兩端和質粒，產生相同黏性末端便于構建重組質粒，而C基因兩端無BamHⅠ的識別序列，因此構建基因表達載體時，需用EcoRⅠ分別處理C基因和質粒而不用BamHⅠ。DNA連接酶連接目的基因和質粒之間的粘性末端，形成的化學鍵是磷酸二酯鍵。

（3）用含C基因的農桿菌侵染菊花愈傷組織時，需在培養基中添加酚類物質，以吸引農桿菌移向菊花細胞，有利于C基因成功轉化；C基因的遺傳特性能在菊花體內維持和表達的關鍵是目的基因插入到了菊花細胞的染色體DNA上；圖示質粒上的標記基因是潮霉素抗性基因，因此為篩選出成功轉化的菊花細胞，應在篩選培養基中添加潮霉素。

（4）C基因表達的產物是mRNA，可以利用分子雜交法進行檢測。