Question

【題目】環境中大量的尿素存在會造成污染環境；土壤中有一些細菌含有脲酶，可通過降解尿素產生氨，使酚紅指示劑呈現紅色。某研究小組從土壤中篩選產脲酶細菌，用以回收氮源同時凈化環境。

（1）在培養產脲酶菌株在內的異養微生物時，培養基營養成分應包括水和__________（用序號組合回答）。

①蔗糖 ②尿素 ③生長因子 ④葡萄糖 ⑤無機鹽

圖是從土壤中篩選產脲酶細菌的過程，請據圖回答：

（2）分離培養細菌時必須進行無菌操作，培養基的滅菌一般采用__________法。配制培養基時，滅菌與調節pH的先后順序是_____________。

（3）從土壤中篩選產脲酶細菌，下列實驗操作正確的______________。

A.將土壤用無菌水稀釋，此過程在超凈操作臺上操作

B.將不同濃度的土壤稀釋液涂布于不同平板上

C.可用加酚紅指示劑選擇培養基篩選分解尿素的細菌

D.可將固體培養基直立放入適宜溫度的恒溫箱中培養3-4天

（4）利用產脲酶細菌生產分泌性脲酶，以下符合該酶分離純化的正確流程是____________。

②冷凍干燥 ①制成酶制劑 ③發酵液過濾 ④層析法提純蛋白酶

Answer 1

【答案】①②③⑤/②③④⑤ 高壓蒸汽滅菌 先調pH后滅菌 ABC ③④②①

【解析】

培養基的基本成分是水、無機鹽、碳源和氮源；制培養基時，為防止雜菌感染，應先調PH后滅菌。

（1）在培養產脲酶菌株在內的異養微生物時，培養基營養成分應包括水、無機鹽、碳源（蔗糖或葡萄糖）、生長因子，以尿素作為唯一的氮源。

（2）培養基的滅菌一般采用高壓蒸汽滅菌法。配制培養基時，為防止雜菌感染，應先調PH后滅菌。

（3）從土壤中篩選產脲酶細菌，根據題圖可知實驗所用接種方法為稀釋涂布平板法，因此正確操作是：將土壤用無菌水稀釋，此過程在超凈操作臺上操作，A正確； B.將不同濃度的土壤稀釋液涂布于不同平板上，B正確； C.可用加酚紅指示劑選擇培養基篩選分解尿素的細菌，C正確；D.可將固體培養基倒置放入適宜溫度的恒溫箱中培養3-4天，D錯誤。

（4）用產脲酶細菌生產分泌性脲酶，該酶分離純化的正確流程是：發酵液過濾→層析法提純蛋白酶→冷凍干燥→制成酶制劑。