Question

【題目】為生產具有特定性能的α-淀粉酶，研究人員從某種海洋細菌中克隆了α-淀粉酶基因（1 656個堿基對），利用基因工程大量制備α-淀粉酶，實驗流程見下圖。請回答下列問題：

（1）利用PCR技術擴增α-淀粉酶基因前，需先獲得細菌的________。

（2）為了便于擴增的DNA片段與表達載體連接，需在引物的________端加上限制性酶切位點，且常在兩條引物上設計加入不同的限制性酶切位點，主要目的是________。

（3）進行擴增時，反應的溫度和時間需根據具體情況進行設定，下列選項中________的設定與引物有關，________的設定與擴增片段的長度有關。（填序號）

①變性溫度 ②退火溫度 ③延伸溫度 ④變性時間 ⑤退火時間 ⑥延伸時間

（4）下圖表示篩選獲得的工程菌中編碼α-淀粉酶的mRNA的部分堿基序列：

圖中虛線框內mRNA片段包含________個密碼子，如虛線框后的序列未知，預測虛線框后的第一個密碼子最多有________種。

（5）獲得工程菌表達的α-淀粉酶后，為探究影響酶活性的因素，以濃度為1%的可溶性淀粉為底物測定酶活性，結果如下：

緩沖液	50 mmol/L Na2HPO4-KH2PO4				50 mmol/L Tris-HCl				50 mmol/L Gly-NaOH
pH	6.0	6.5	7.0	7.5	7.5	8.0	8.5	9.0	9.0	9.5	10.0	10.5
酶相對活性%	25.4	40.2	49.8	63.2	70.1	95.5	99.5	85.3	68.1	63.7	41.5	20.8

根據上述實驗結果，初步判斷該α-淀粉酶活性最高的條件為________。

Answer 1

【答案】 基因組DNA 5' 使DNA片段能定向插入表達載體，減少自連 ② ⑥ 8 13 pH為8.5，緩沖液為50 mmol/L Tris-HCl