Question

【題目】骨肉瘤是最常見(jiàn)的惡性成骨性腫瘤之一�？蒲腥藛T研究曲古抑菌A（TSA）對(duì)人骨肉瘤細(xì)胞凋亡的影響及作用機(jī)制，為臨床治療尋找新方向。實(shí)驗(yàn)過(guò)程如下：

步驟1 用含青霉素和鏈霉素的高糖培養(yǎng)基，在37℃、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)人骨肉瘤細(xì)胞一段時(shí)間。

步驟2 取適宜濃度的處于生長(zhǎng)旺盛期的人類骨肉瘤細(xì)胞，用加入不同濃度的TSA（0～200

ng·mL-1）的培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)24h。

步驟3 對(duì)各組細(xì)胞進(jìn)行抽樣檢測(cè)，檢測(cè)方法是先用臺(tái)盼藍(lán)試劑（一種細(xì)胞活性染料）染色再用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，統(tǒng)計(jì)細(xì)胞存活率（未染色細(xì)胞數(shù)/細(xì)胞總數(shù)×100%），結(jié)果如圖1。

步驟4 分別提取TSA濃度為0 ng·mL-1、25 ng·mL-1、50 ng·mL-1處理的3組細(xì)胞，測(cè)量細(xì)胞中與凋亡相關(guān)的基因（Bax、Bcl-2）和β-肌動(dòng)蛋白基因（不同的組織細(xì)胞中表達(dá)相對(duì)恒定）表達(dá)的蛋白質(zhì)量并計(jì)算比值，結(jié)果如圖2。

分析回答：

（1）與正常成骨細(xì)胞相比，骨肉瘤細(xì)胞容易在體內(nèi)分散和轉(zhuǎn)移，其主要原因是 。高糖培養(yǎng)基中加入青霉素和鏈霉素的目的是 ，細(xì)胞培養(yǎng)箱中保持5% CO2的作用是 。

（2）步驟2中，設(shè)置0 ng·mL-1 TSA實(shí)驗(yàn)的主要目的是 。

（3）用臺(tái)盼藍(lán)試劑檢測(cè)細(xì)胞活性的主要原理是 。

（4）圖1所示結(jié)果表明 。

（5）根據(jù)圖2判斷，骨肉瘤細(xì)胞中 基因過(guò)度表達(dá)會(huì)加速細(xì)胞凋亡。

Answer 1

【答案】（1）骨肉瘤細(xì)胞膜上的糖蛋白等物質(zhì)減少 防止雜菌污染 維持培養(yǎng)液pH

（2）排除非測(cè)試因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響

（3）活細(xì)胞的細(xì)胞膜具有選擇透過(guò)性，臺(tái)盼藍(lán)不能進(jìn)入活細(xì)胞內(nèi)（死細(xì)胞膜失去選擇透過(guò)性，臺(tái)盼藍(lán)能進(jìn)入死細(xì)胞內(nèi)）

（4）TSA濃度越高對(duì)骨肉瘤細(xì)胞凋亡的促進(jìn)作用越強(qiáng)

（5）Bax

【解析】

（1）骨肉瘤細(xì)胞屬于癌細(xì)胞，癌細(xì)胞細(xì)胞膜上的糖蛋白等物質(zhì)減少，細(xì)胞容易在體內(nèi)分散和轉(zhuǎn)移。高糖培養(yǎng)基中加入青霉素和鏈霉素的目的防止雜菌污染。細(xì)胞培養(yǎng)箱中保持5% CO2的作用是維持培養(yǎng)液pH。

（2）0 ng·mL-1 TSA實(shí)驗(yàn)組為對(duì)照組，排除除試驗(yàn)因素以為非測(cè)試因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。

（3）活細(xì)胞的細(xì)胞膜具有選擇透過(guò)性，臺(tái)盼藍(lán)不能進(jìn)入活細(xì)胞內(nèi)，而死細(xì)胞膜失去選擇透過(guò)性，臺(tái)盼藍(lán)能進(jìn)入死細(xì)胞內(nèi)，這樣，活細(xì)胞不會(huì)染成顏色，而死細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)藍(lán)色，從而可以統(tǒng)計(jì)出細(xì)胞死亡個(gè)數(shù)。

（4）TSA濃度越高，細(xì)胞存活率越低，細(xì)胞死亡數(shù)越多，說(shuō)明TSA濃度越高對(duì)骨肉瘤細(xì)胞凋亡的促進(jìn)作用越強(qiáng)。

（5）TSA濃度越高，培養(yǎng)液中的Bax蛋白更多， Bax蛋白由Bax基因表達(dá)，因此說(shuō)明骨肉瘤細(xì)胞中Bax基因過(guò)度表達(dá)出Bax蛋白，會(huì)加速細(xì)胞凋亡。