Question

【題目】請回答下列問題

（1）為了從土壤中篩選能有效降解有害有機化合物A的細菌，研究人員用化合物A、磷酸鹽、鎂鹽以及微量元素配制的培養基，成功地篩選出能高效降解化合物A的細菌（目的菌），從功能看該培養基為____________培養基，在對該菌進行分離、純化、計數過程中，常采用________法接種。實驗過程中還需配制空白培養基作為對照，如果空白培養基中無菌落形成而實驗組培養基中形成的菌落如圖所示，造成這種結果的原因可能是______ 。

（2）用稀釋涂布平板法統計菌落數目時，最好選擇群落在30-300的平板進行計數。若統計出在一稀釋倍數為105的平板上的平均菌落數為30個，所用稀釋液的體積為0.2mL，則每毫升樣品中的細菌數為________________________。菌落是指________________________

（3）某植物富含果膠、淀粉、蛋白質和纖維素成分。在用該材料提取過果膠和淀粉后的剩渣加工飲料工藝研究中，將剩渣制成的汁液經蛋白酶和纖維素酶徹底酶解處理后，發現仍存在渾濁和沉淀問題，你將如何解決這一問題?______________。在果汁生產中，為了提高果膠酶的使用效率和產品純度，一般需要將酶用______________法進行固定化處理。

（4）用凝膠色譜法提取分離血紅蛋白時，用_______________洗滌紅細胞，用_________破裂紅細胞使血紅蛋白得以釋放，如果裝填的凝膠色譜柱中出現氣泡，氣泡會_________，降低分離效果。

Answer 1

【答案】選擇 稀釋涂布平板 土壤中含有4種能降解有機物A的細菌或培養基不純含有其他碳源和氮源或接種過程被雜菌感染 1.5107 由單固體培養基表面或內部生長繁殖到一定程度，形成以母細胞為中心的個微生物細胞在適宜肉眼可見的、有一定形態、構造等特征的子細胞集團 在渾濁和有沉淀的汁液中加入果膠酶和淀粉酶 化學結合法或物理吸附法 生理鹽水 蒸餾水和甲苯 攪亂蛋白質的洗脫次序

【解析】

1、實驗室中目的菌株的篩選的原理：人為提供有利于目的菌株生長的條件(包括營養、溫度、pH等) ,同時抑制或阻止其他微生物生長。

2、微生物常見的接種的方法

①平板劃線法：將已經熔化的培養基倒入培養皿制成平板，接種，劃線，在保溫箱里培養。在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數逐漸減少，最后可能形成單個菌落。

②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經過大量稀釋后，均勻涂布在培養皿表面，經培養后可形成單個菌落。

3、凝膠色譜法是根據相對分子質量大小分離蛋白質的有效方法，相對分子質量較小的蛋白質容易進入凝膠內部的通道，路程長，移動的速度慢，相對分子質量較大的蛋白質不容易進入凝膠內部的通道，路程短，移動的速度快。

(1)只有能利用化合物A微生物才能在該培養基上生存，因此該培養基為選擇培養基，其能成功地篩選出能高效降解化合物A的細菌(目的菌)；接種微生物常用平板劃線法和稀釋涂布平板法，其中稀釋涂布平板法可對微生物進行計數，因此在分離、純化、計數過程中，常采用稀釋涂布法接種；如果空白培養基中無菌落形成而實驗組培養基中形成的菌落如圖所示，造成這種結果的原因可能是土壤中含有4種能降解有機化合物A的細菌或培養基不純，含有其他碳源和氮源或接種過程中被雜菌污染。

(2)用稀釋涂布平板法統計菌落數目時，最好選擇群落在30-300的平板進行計數。若統計出在一稀釋倍數為105的平板上的平均菌落數為30個，所用稀釋液的體積為0.2mL，則每毫升樣品中的細菌數為30÷0.2×105= 1.5107個。菌落是指由單固體培養基表面或內部生長繁殖到一定程度，形成以母細胞為中心的個微生物細胞在適宜肉眼可見的、有一定形態、構造等特征的子細胞集團。

(3)某植物富含果膠、淀粉、蛋白質和纖維素成分。在用該材料提取過果膠和淀粉后的剩渣加工飲料工藝研究中，將剩渣制成的汁液經蛋白酶和纖維素酶徹底酶解處理后，發現仍存在渾濁和沉淀問題，這是由果膠和淀粉造成的，則可在渾濁和有沉淀的汁液中加入果膠酶和淀粉酶，固定化方法包括包埋法、化學結合法和物理吸附法，由于酶分子比較小，容易從包埋材料中漏出，因此固定化酶一般采用化學結合法和物理吸附法。

（4）用凝膠色譜法提取分離血紅蛋白時，用生理鹽水洗滌紅細胞，用蒸餾水和甲苯破裂紅細抱胞使血紅蛋白得以釋放，如果裝填的疑膠色譜柱中出現氣泡，氣泡會攪亂洗脫次序，降低分離效果。