Question

【題目】α-1抗胰蛋白酶（α-1—AT）是人類血漿中最重要的蛋白酶抑制劑，其主要作用是保護機體正常細胞和器官不受蛋白酶的損傷，抑制感染和炎癥，維持機體內環境的平衡。下圖是以基因工程技術獲取重組α-1抗胰蛋白酶（HumanA1AT）的兩種方法。回答下列問題：

（1）為獲取α-1—AT基因，可采集人的血液，提取_____________合成總cDNA，然后以cDNA為模板，采用PCR技術擴增α-1—AT基因，該技術需要的酶是_______________。

（2）b過程中，可添加酚類化合物，其作用是______________。將α-1—AT基因導入大腸桿菌細胞時，可用____________處理細胞，使其變為感受態細胞。

（3）已知α-1抗胰蛋白酶需要經過膜系統加工形成正確的空間結構才能有活性。據此推導，方法_______（填“Ⅰ”或“Ⅱ”）具有優勢，其優勢是______________________。

（4）若要檢測小麥胚乳細胞或大腸桿菌細胞中是否翻譯出HumanA1AT，可用的檢測物質是HumanA1AT的______（填“基因”或“抗體”）。

Answer 1

【答案】 總RNA（或mRNA） 熱穩定DNA聚合酶（Taq酶） 吸引農桿菌移向小麥受體細胞，有利于α-1—AT基因轉化成功 Ca2+ Ⅰ 小麥屬于真核生物，具有膜系統，能對初始Human A1AT多肽進行高效加工 抗體

【解析】【試題分析】

本題考查基因工程的相關知識，要求考生識記基因工程的原理及操作步驟，掌握各操作步驟的相關細節，能結合所學的知識準確答題。

（1）總cDNA是以mRNA為模板逆轉錄合成的，所以需要提取人的總RNA或mRNA；PCR擴增的原理是DNA復制， 需要的酶是熱穩定DNA聚合酶（Taq酶）。

（2）b過程表示農桿菌感染小麥受體細胞，酚類物質可吸引農桿菌移向小麥受體細胞，使農桿菌Ti質粒上的T－DNA轉移到受體細胞并整合到受體細胞染色體的DNA上，有利于目的基因成功轉化；將α-1—AT基因導入大腸桿菌細胞時，可用Ca2+處理細胞，使其變為感受態細胞。

（3）由于大腸桿菌為原核生物，無生物膜系統，而小麥為真核生物，具有生物膜系統，故要獲取α-1抗胰蛋白酶，選擇方法Ⅰ具有優勢，其優勢是小麥屬于真核生物，具有膜系統，能對初始Human A1AT多肽進行高效加工。

（4）若要檢測小麥胚乳細胞或大腸桿菌細胞中是否翻譯出HumanA1AT，可用抗原—抗體雜交技術，所以可用的檢測物質是HumanA1AT的抗體。