Question

【題目】血紅蛋白是人和其他脊椎動物紅細胞的主要組成成分，負責血液中O2和部分CO2的運輸。請根據血紅蛋白的提取和分離流程圖回答問題。

（1）將實驗流程圖補充完整：A為_______，B為_______。

（2）洗滌紅細胞的目的是去除___________，離心速率過快和時間過長會使____一同沉淀，達不到分離的效果。紅細胞洗滌干凈的標志是_____________。

（3）凝膠色譜柱裝填完成后，立即連接緩沖液洗脫瓶，充分洗滌平衡凝膠12小時，其目的是______________。

（4）實驗中如何判斷色譜柱制作是否成功_____________________________。

（5）判斷純化的蛋白質是否達到要求，需要進行蛋白質純度的鑒定，在鑒定的方法中，使用最多的是_________________________。

Answer 1

【答案】血紅蛋白的釋放 樣品的加入和洗脫 雜蛋白(血漿蛋白) 白細胞 離心后的上清液中沒有黃色 使凝膠裝填緊密 如果紅色區帶均勻一致的移動，說明色譜柱制作是成功的 SDS---聚丙烯酰胺凝膠電泳

【解析】

1、血紅蛋白的提取與分離的實驗步驟主要有：

（1）樣品處理：①紅細胞的洗滌，②血紅蛋白的釋放，③分離血紅蛋白；

（2）粗分離：①分離血紅蛋白溶液，②透析；

（3）純化：調節緩沖液面→加入蛋白質樣品→調節緩沖液面→洗脫→收集分裝蛋白質；

（4）純度鑒定--SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳。

2、分析題圖：A表示血紅蛋白的釋放，B表示樣品的加入和洗脫。

（1）樣品處理過程為：紅細胞的洗滌→血紅蛋白的釋放→分離血紅蛋白溶液→透析，所以A表示血紅蛋白的釋放，B表示樣品的加入和洗脫。

（2）洗滌紅細胞的目的是去除雜質蛋白。此外，離心速度過高和時間過長，會使白細胞和淋巴細胞一同沉淀，也得不到純凈的紅細胞，影響后續血紅蛋白的提取純度．重復洗滌三次，直至上清液中沒有黃色，表明紅細胞已洗滌干凈。

（3）凝膠色譜柱裝填完成后，立即連接緩沖液洗脫瓶，充分洗滌平衡凝膠的目的就是是使凝膠裝填緊密。

（4）如果凝膠色譜柱裝填得很成功、分離操作也正確的話，能清楚地看到血紅蛋白的紅色區帶均勻一致的移動，隨著洗脫液緩慢流出；如果紅色區帶歪曲、散亂、變寬，說明分離的效果不好，這與凝膠色譜柱的裝填有關。

（5）鑒定純化的蛋白質是否達到要求，常用的方法是SDS---聚丙烯酰胺凝膠電泳。