Question

【題目】紅細胞內含有大量血紅蛋白，我們可以選用豬、牛、羊或其他哺乳動物的血液進行實驗，來提取和分離血紅蛋白。請回答下列有關問題：

(1)血紅蛋白的提取和分離一般可分為四步：________、粗分離、純化和________。

(2)實驗前取新鮮的血液，要切記在采血容器中預先加入檸檬酸鈉，取血回來，馬上進行處理、離心后，收集血紅蛋白溶液。

以上所述的過程即是樣品處理，它包括紅細胞的洗滌、____________________、____________________。

(3)收集的血紅蛋白溶液要進行粗分離，其方法是________。然后通過________將樣品進一步純化，最后經________進行純度鑒定。

(4)下圖是凝膠色譜法分離血紅蛋白時樣品加入和洗脫示意圖。請據圖回答下列問題。

①在加樣品示意圖中，正確的順序是___________________。

②用吸管加樣品時，應注意正確操作，分別是______________、______________、________________。

③待________________時，才加入緩沖溶液。

④待________接近色譜柱底端時，用試管收集流出液，每________mL收集一管，連續收集。

Answer 1

【答案】 樣品處理 純度鑒定 血紅蛋白的釋放 分離血紅蛋白溶液 透析 凝膠色譜法 SDS－聚丙烯酰胺凝膠電泳 ④→①→②→③ 不能破壞凝膠面 貼著管壁加樣 使吸管管口沿管壁環繞移動 樣品完全進入凝膠層 紅色的蛋白質 5

【解析】試題分析：血紅蛋白的提取和分離一般可分為四步：樣品處理、粗分離、純化、純度鑒定；樣品處理包括四個步驟，即紅細胞的洗滌、血紅蛋白的釋放、分離血紅蛋白溶液和透析；透析袋是利用半透膜制作的，半透膜可以讓小分子可以自由進出，而大分子不能通過；樣品純化的目的是通過凝膠色譜法將相對分子質量大的蛋白質除去。

（1）血紅蛋白的提取和分離一般分為四步：樣品處理、粗分離、純化和純度鑒定。

（2）樣品處理包括紅細胞洗滌、血紅蛋白釋放、分離血紅蛋白溶液和透析四步。

（3）收集的血紅蛋白溶液要通過透析的方法進行粗分離；樣品的純化是通過膠色譜法將相對分子質量大的雜質蛋白除去，最后經SDS-聚丙烯酰氨凝膠電泳進行純度鑒定。

（4）①加樣和洗脫的具體過程為:調節緩沖液面→加入蛋白質樣品→調節緩沖液面→洗脫→收集分裝蛋白質,因此正確的加樣順序是④→①→②→③。

②用吸管加樣時,應注意的正確操作分別是: 使吸管管口沿管壁環繞移動；貼著管壁加樣；不要破壞凝膠面。

③待樣品完全進入凝膠層時，才加入緩沖溶液。

④待紅色的蛋白質接近色譜柱底端時，用試管收集流出液，每5mL收集一管，連續收集。