Question

【題目】人體內的t-PA蛋白能高效降解由血纖維蛋白凝聚而成的血栓，是心梗和腦血栓的急救藥。

（1）為心梗患者注射大劑量的基因工程t-PA會誘發顱內出血。研究證實，將t-PA第84位的半胱氨酸換成絲氨酸，能顯著降低出血副作用。據此，先對天然的t-PA基因進行改造，再采取傳統的基因工程方法表達該突變基因，可制造出性能優異的t-PA突變蛋白，該工程技術稱為__________。

（2）若獲得的t-PA突變基因如圖所示，那么質粒pCLY11需用限制酶__________和__________切開，才能與t-PA突變基因高效連接。

（3）將連接好的DNA分子導入大腸杄菌中，對大腸桿菌接種培養。在培養基中除了加入水、碳源、氮源等營養物質外，還應加入__________進行選擇培養，以篩選成功導入pCLY11的細菌。配置好的培養基通常采用__________法進行滅菌。

（4）對培養得到的菌落進行篩選，其中菌落為__________色的即為含t-PA突變基因重組DNA分子的大腸桿菌。得到的大腸桿菌能否分泌t-PA突變蛋白，可通過該細胞產物能否與__________特異性結合進行判定。

Answer 1

【答案】蛋白質工程 XmaI BglII 新霉素 高壓蒸汽滅菌法 白 t-PA蛋白抗體

【解析】

本題考查基因工程和蛋白質工程的相關知識。基因工程的基本操作步驟：獲取目的基因→構建基因表達載體→導入受體細胞→得到轉基因生物→目的基因檢測與鑒定。蛋白質工程可以通過基因修飾或基因合成，對現有的蛋白質進行改造，或制造新的蛋白質以滿足人類的生產和生活的需求。

（1）對天然的t-PA基因進行改造，以制造出性能優異的t-PA突變蛋白的技術稱為蛋白質工程；

（2）如圖所示，由于目的基因的兩端的堿基序列分別是CCGG、CTAG ，所以應用XmaI和BglII兩種限制酶切割，以便于把目的基因連接到質粒pCLY11上；

（3）由圖1可知，將連接好的DNA分子導入大腸桿菌中，含t-PA突變基因重組DNA分子的細胞具有新霉素抗性，在培養基中應加入新霉素進行選擇培養，以篩選成功導入pCLY11的細菌。配置好的培養基通常采用高壓蒸汽滅菌法進行滅菌；

（4）由于限制酶切割質粒破壞了mlacZ基因，所以含t-PA突變基因重組DNA分子的細胞所長成的菌落呈白色。檢查t-PA突變蛋白可用t-PA抗體，觀察能否發生特異性結合進行判定。