Question

【題目】請回答下列關于固定化酶和細菌培養實驗的問題：

（1）某興趣小組欲利用固定化酶進行酶解淀粉的實驗，分組見表。

組別	固定化酶柱長度（cm）	淀粉溶液的流速（mL·min-1）
甲	10	0.3
乙	10	0.5
丙	15	0.3
丁	15	0.5

將吸附了-淀粉酶的石英砂裝入柱中后，需用蒸餾水充分洗滌固定化酶柱，以除去_________________。按上表分組，將配制好的淀粉溶液加入到固定化酶柱中，然后取一定量的流出液進行KI-I2檢測，若流出液呈紅色，表明有________________生成；若各組呈現的顏色有顯著差異，則流出液中淀粉水解產物濃度最高的是_____________組。

（2）下列關于上述固定化酶實驗的敘述，錯誤的是_____________。

A.固定化酶柱長度和淀粉溶液流速決定了酶柱中酶的含量

B.淀粉溶液流速過快會導致流出液中含有淀粉

C.各組實驗所用的淀粉溶液濃度應相同

D.淀粉溶液的pH對實驗結果有影響

（3）現有一份污水樣品，某興趣小組欲檢測其中的細菌數，進行以下實驗。將一定量的污水樣品進行濃度梯度稀釋。取適量不同稀釋度的稀釋液，用______________法分別接種于固體平面培養基上，經培養后進行計數。該實驗應注意，接種前，從盛有_____________的容器中將玻璃刮刀取出，放在酒精燈火焰上灼燒，冷卻后待用；分組時，需用_____________作為對照。

（4）在上述細菌培養實驗中進行計數時，應計數的是接種了______________。

A.各個稀釋度樣品的培養基上的細菌數

B.合理稀釋度樣品的培養基上的細菌數

C.各個稀釋度樣品的培養基上的菌落數

D.合理稀釋度樣品的培養基上的菌落數

Answer 1

【答案】未吸附的α-淀粉酶 糊精 丙 A 涂布分離 70%酒精 未接種的培養基 D

【解析】

①分析表中信息：利用固定化酶進行酶解淀粉的實驗，自變量是固定化酶柱的長度、淀粉溶液的流速，因變量是淀粉的水解產物糊精，可利用糊精遇KI-I2溶液顯紅色的原理對因變量進行檢測；實驗過程中，淀粉溶液的濃度等無關變量應控制相同且適宜。α-淀粉酶的固定化過程中，由于α-淀粉酶不是100%地被吸附在石英砂上，因此需用蒸餾水洗去未吸附在石英砂上的α-淀粉酶。固定化酶柱越長、淀粉溶液流速越慢，酶促反應越徹底，生成的淀粉的水解產物越多。②對微生物進行計數，可采用涂布分離法進行接種，在操作過程中需防止雜菌污染。在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物將被分散成單個細胞，從而能在培養基表面形成單個菌落。為了檢測培養基滅菌是否合格，可隨機取若干滅菌后的未接種的培養基作為對照。

（1）由于裝入柱中的石英砂上含有未吸附的α-淀粉酶，所以需用蒸餾水充分洗滌，以免影響實驗結果；淀粉酶催化淀粉水解生成糊精，糊精與KI-I2反應呈紅色；酶與底物反應時間越長，產生的產物越多；丙組固定化酶柱最長、淀粉溶液的流速最慢，說明固定化酶與淀粉接觸時間最長，淀粉水解產物的濃度最高。

（2）固定化酶柱長度和淀粉溶液的流速決定了酶與淀粉溶液反應的時間，不能決定酶柱中酶的含量，A錯誤；若淀粉溶液流速過快，則反應不充分，會使部分淀粉未進行反應即流出，B正確；根據實驗設計的等量原則，四組實驗所用的淀粉溶液濃度應相同，C正確；酶的活性受pH影響，D正確。

（3）對細菌進行計數時，應用涂布分離法對細菌進行接種，培養后根據菌落數進行計數；接種前玻璃刮刀需先用70%的酒精溶液進行消毒，然后放到酒精燈上灼燒滅菌；為排除培養基本身對實驗結果的影響，應用未接種的培養基在相同條件下培養作為對照。

（4）若培養液稀釋不充分，則接種后培養基上的菌落會連成一片，不宜計數，所以應選擇合理稀釋度樣品的培養基進行計數，D項符合題意。