Question

【題目】下列關(guān)于“淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的檢測”實驗的敘述，正確的是

A.淀粉溶液過柱時控制流速，是為了便于接取產(chǎn)物

B.洗滌反應(yīng)柱時控制流速，是為了防止洗去已固定的淀粉酶

C.實驗后用蒸餾水洗滌反應(yīng)柱，是為了去除已固定的淀粉酶

D.洗滌后的反應(yīng)柱應(yīng)高溫滅菌，避免微生物分解反應(yīng)柱中的酶

Answer 1

【答案】B

【解析】

實驗的基本步驟：

1、配置可溶性淀粉溶液：取35mg可溶性淀粉溶于50ml沸水。（可溶性淀粉先用冷水調(diào)成糊狀，再加入沸水中。這樣溶解才會形成澄清的溶液）將配置好的淀粉溶液放置在60℃（酶的最適溫度50℃~75℃，使后期淀粉酶經(jīng)過時能達(dá)到酶的最高催化活性）的水浴鍋（水浴鍋中添加去離子水）中備用。

2、α-淀粉酶的固定化：在50ml燒杯中將5mg α-淀粉酶溶于4ml蒸餾水中。（注意：由于酶不純，可能有些不溶物。）再加入5g石英砂，不時攪拌（攪拌切忌太用力），固定15min。（使酶能吸附到石英砂表面）

3、檢驗未吸附的游離淀粉酶：小心倒掉上清液后（未吸附的游離淀粉酶應(yīng)該在上清液中），用10~15ml的蒸餾水小心清洗石英砂2~3次，每次取其上清液0.5ml于試管中，同時滴加淀粉溶液充分混勻。再加入1滴KI-I2溶液，若溶液變?yōu)樗{(lán)色，說明上清液中已無游離α-淀粉酶，如果溶液為紅色，繼續(xù)用蒸餾水清洗，直至淀粉溶液變?yōu)樗{(lán)色為止。（檢驗未吸附的游離淀粉酶是否洗滌干凈，每次蒸餾水洗滌都可以使未吸附的游離淀粉酶溶于上清液，而游離淀粉酶可以與加入的淀粉溶液反應(yīng)，產(chǎn)生的糊精遇碘變紅。單純的淀粉溶液與碘反應(yīng)會變藍(lán)色。于是不斷清洗，直至檢驗不存在了。）

4、先把濾布（可以考慮濾紙片，使石英砂不從注射器中漏出）放于固定化酶柱中，再裝入有α-淀粉酶的石英砂約4ml，裝柱過程中可在裝有石英砂的燒杯中加入少量蒸餾水（便于石英砂流入層析柱），同時適當(dāng)打開層析柱的調(diào)節(jié)裝置（使多余的液體流出）。

5、把灌注了固定化酶的層析柱放在支架上，用滴管加淀粉溶液，使淀粉溶液約以0.3ml/min（6滴/min）的流速過柱，在流出1~2ml反應(yīng)液后（讓塑料管中的水流出），轉(zhuǎn)動關(guān)閉層析柱的調(diào)節(jié)裝置，放置5min。（充分的反應(yīng)時間，使后面檢測效果明顯。）

6、打開調(diào)節(jié)裝置，以0.3ml/min（6滴/min）的流速過柱，流出1~2ml反應(yīng)液后（讓塑料管中的溶液流出），用兩支試管分別接收0.5ml流出液，其中一支加入蒸餾水稀釋1倍，按以下表格在試管中加入相應(yīng)試劑，觀察結(jié)果。

7、固定后的α-淀粉酶可以重復(fù)利用，實驗后用10倍柱體積的蒸餾水洗滌固定化酶柱，然后放置在4℃冰箱中保存。

A、淀粉溶液過柱時控制流速，是為了讓塑料管中的水流出，并充分的反應(yīng)時間，使后面檢測效果明顯，A錯誤；

B、洗滌反應(yīng)柱時控制流速，是為了讓塑料管中的溶液流出并防止洗去已固定的淀粉酶便于接取，B正確；

C、實驗后用蒸餾水洗滌反應(yīng)柱，是為了去除未吸附的游離淀粉酶，C錯誤；

D、洗滌后的反應(yīng)柱應(yīng)高溫滅菌，避免微生物分解反應(yīng)柱中的淀粉，D錯誤；

故選B。