Question

【題目】蛋白酶在全球酶制劑市場中銷售額達到60%以上，應用非常廣泛。許多細菌和霉菌都能產生胞外蛋白酶。芽孢桿菌是一類具有較高的產生蛋白酶能力的細菌，其芽孢休眠體對高溫和很多有毒化學物質都有很強的抗性。在一定條件下，從土壤中篩選高產蛋白酶芽孢桿菌的步驟如下：

（1）將土壤懸液置于75～80℃恒溫水浴中處理15min的目的是_________________________。

（2）牛奶培養基成分為：牛肉膏、蛋白胨、脫脂奶粉、NaCl、瓊脂、水，其中提供氮源的是_________，用_________法將微生物接種到該培養基表面。

（3）從牛奶培養基上如何挑選出蛋白酶高產菌株?___________________________，這樣挑選的理由是_________________________________________________。

（4）根據相對分子質量的大小純化發酵后獲得的蛋白酶的有效方法是___________________。

（5）蛋白酶在加酶洗衣粉中應用最廣泛、效果最明顯的是_____________________。

Answer 1

【答案】殺死非芽孢細菌及其他微生物 牛肉膏、蛋白胨、脫脂奶粉 稀釋涂布平板（或平板劃線） 挑選無色透明圈大的菌落 牛奶中蛋白質被蛋白酶水解后，會形成以蛋白酶產生菌為中心的無色透明圈，且蛋白酶高產菌株水解蛋白質能力更強，透明圈會更大 凝膠色譜法（或者分配色譜法） 堿性蛋白酶

【解析】

微生物的研究通常包含微生物的獲得、分離純化、培養以及保存等。微生物分離的基本步驟為配制培養基、接種、培養篩選等。微生物的實驗室培養，常用到培養基，培養基，是指供給微生物、植物或動物（或組織）生長繁殖的，由不同營養物質組合配制而成的營養基質。一般都含有碳水化合物、含氮物質、無機鹽（包括微量元素）、維生素和水等幾大類物質。

（1）將土壤懸液置于75～80℃恒溫水浴中處理15min能殺死非芽孢細菌及其他微生物。

（2）作為構成生物體的蛋白質、核酸及其他氮素化合物的材料。把從外界吸入的氮素化合物或氮氣，稱為該生物的氮源。牛奶培養基成分為：牛肉膏、蛋白胨、脫脂奶粉、NaCl、瓊脂、水，其中提供氮源的是牛肉膏、蛋白胨、脫脂奶粉。用稀釋涂布平板（或平板劃線）法將微生物接種到該培養基表面，比較透明圈的大小。

（3）牛奶中蛋白質被蛋白酶水解后，會形成以蛋白酶產生菌為中心的無色透明圈，且蛋白酶高產菌株水解蛋白質能力更強，透明圈會更大。因此挑選無色透明圈大的菌落即可挑選出蛋白酶高產菌株。

（4）凝膠色譜(凝膠層析)是一種液體柱色譜。利用這種方法，
可根據樣品中各種物質分子量大小的不同，
將樣品通過多孔膠床來達到分離的目的。故根據相對分子質量的大小純化發酵后獲得的蛋白酶的有效方法是凝膠色譜法（或者分配色譜法）。

（5）堿性蛋白酶在加酶洗衣粉中應用最廣泛、效果最明顯。