Question

【題目】下圖是單克隆抗體制備流程階段示意圖。請回答下面問題：

（1）經過HAT培養基選擇培養的細胞，還需要進一步培養和篩選。篩選過程通常通過“有限稀釋法”完成，具體做法是：將從HAT培養基上篩選出的細胞稀釋到適宜濃度，再向細胞培養板（如圖）的每個孔中滴加適量的稀釋液，其概率為每孔內落入一個細胞，從而能達到____________的目的；培養一段時間后取上清液，上清液能與____________結合的培養孔為陽性孔。陽性孔中的細胞還不能保證是來自單個細胞，繼續進行有限稀釋，重復若干次，直到確信每孔中增殖細胞為單克隆細胞。

（2）將所選的細胞在體外條件下進行大規模培養，培養過程中應嚴格控制無菌無毒的環境。其中，要控制無菌環境應進行的操作有______________________________、________________________。

（3）在培養細胞的過程中，細胞內合成的特異性抗體通過____________方式排出細胞，該過程____________（填“需要”或“不需要”）膜上蛋白質的參與。

（4）單克隆抗體用作體外診斷試劑，可以高效準確地進行人類疾病和動植物病害的診斷和病原鑒定。其原理是______________________________。

Answer 1

【答案】單一細胞培養以保證抗體純度（或克隆化培養） 特定抗原 對培養液和培養用具進行無菌處理 向培養液添加一定量的抗生素 胞吐 不需要 單克隆抗體純度高、特異性強，能準確識別各種抗原的細微差異，并和特定抗原發生特異性結合

【解析】

將特定的抗原注射小鼠，篩選出產生抗體的淋巴細胞，與骨髓瘤細胞融合，轉移到HAT培養基中培養，未融合的細胞死亡，而雜交瘤細胞存活，雜交瘤細胞分開培養，選育出產生高特異性抗體的細胞。

（1）為選育出能產生高特異性抗體的細胞，要將從HAT培養基上篩選出的細胞稀釋到7～10個細胞/ml，每孔滴入0.1ml細胞稀釋液，其目的是使每個孔內不多于一個細胞，達到單克隆培養的目的（或單一細胞培養以保證抗體的純度）；培養一段時間后取上清液，上清液能與特定抗原合的培養孔為陽性孔。

（2）通過對培養液和培養用具進行無菌處理，控制無菌環境。

（3）特異性抗體化學本質是蛋白質，以胞吐方式排出細胞，胞吐的過程需要消耗能量，但不需要載體蛋白的協助。

（4）單克隆抗體純度高、特異性強，能準確識別各種抗原的細微差異，并和特定抗原發生特異性結合，所以單克隆抗體用作體外診斷試劑，可以高效準確地進行人類疾病和動植物病害的診斷和病原鑒定。