Question

【題目】某質粒上有SalⅠ、HindⅢ、BamHⅠ三種限制酶切割位點，同時還含有抗四環素基因和抗氨芐青霉素基因。利用此質粒獲得轉基因抗鹽煙草的過程如圖所示，請回答下列問題：

（1）從基因文庫中獲得的抗鹽基因可用PCR技術進行擴增，將__________、__________、四種游離的脫氧核苷酸、Taq酶投入儀器中DNA分子可以進行指數擴增。

（2）在構建重組質粒時，應選用圖中__________兩種限制酶，目的是：_____________。

（3）將目的基因導入煙草常用__________法，該方法是利用了農桿菌___________特點。

（4）為了確定抗鹽煙草培育成功，既要用放射性同位素標記的_____________作探針進行分子雜交檢測，又要用____________________的方法從個體水平鑒定煙草植株的耐鹽性。

Answer 1

【答案】模板DNA 引物 SalI，HindIII 以保證重組DNA序列的唯一性 農桿菌轉化法 Ti質粒的T-DNA可轉移到受體細胞，并整合到受體細胞的染色體DNA上 目的基因（抗鹽基因） 一定濃度的鹽水澆灌煙草植株

【解析】

根據題意和圖示分析可知：質粒和含抗鹽基因的DNA片段上均有SalⅠ、HindⅢ、BamHⅠ三種限制性核酸內切酶酶切位點；

在質粒上，這三種限制酶的切割位點都位于抗四環素基因上，用其任何一種酶都會破壞四環素抗性基因；在含抗鹽基因的DNA片段上，BamHⅠ位于目的基因上，用BamHⅠ切割會破壞目的基因。

（1）PCR技術進行擴增需要將模板DNA、引物、四種游離的脫氧核苷酸、Taq酶投入儀器中DNA分子可以進行指數擴增。

（2）質粒和含有目的基因的外源DNA分子上都含有SalI、Hindm、BamHI三種限制酶切割位點，其中BamHI的切割位點位于目的基因上，用該酶切割會破壞目的基因；若只用SalI一種限制酶切割可能會導致目的基因與運載體反向連接；因此在構建重組質粒時，應選用SalI和HindIII兩種限制酶對質粒和抗鹽基因進行切割，以保證重組DNA序列的唯一性。

（3）將目的基因導入植物細胞采用最多的方法是農桿菌轉化法，利用了農桿菌的Ti質粒的T-DNA可轉移到受體細胞，并整合到受體細胞的染色體DNA上特點。

（4）探針是指用放射性同位素標記的目的基因（抗鹽基因），除了從分子水平上進行檢測，還可以從個體水平上進行鑒定，即用一定濃度的鹽水澆灌煙草植株來鑒定煙草的耐鹽性。