Question

【題目】回答下列（一）、（二）小題：

（一）自生固氮菌是一種能獨立固定氮氣的細菌，其中有些好氧種類能產生PHB（一種生物可降解的熱塑性塑料）。現欲從活性污泥中分離、純化、篩選出高產PHB的固氮菌，操作流程如下：采集土樣→富集培養→分離、純化培養→初步篩選PHB固氮菌→篩選高產PHB固氮菌→保存備用。請回答：

（1）富集培養時，為達到篩選自生固氮菌的目的，在配制培養液時不應添加___________。培養時要將裝有培養液的錐形瓶放置在搖床上振蕩培養，其目的是為細菌的生長提供。

（2）用于篩選高表達量菌株的方法之一是經涂布分離獲得__________。進行分離、純化培養時，要先將培養基倒入__________中，制成平板，此時所使用的培養基與富集培養時有所不同，添加了一定量的__________。

（3）在純化過程中，在固體培養基上劃線時，下列操作正確的是__________。

A.接種環采用70%酒精滅菌

B.接種時應在酒精燈火焰附近進行

C.劃線時要將最后一區的劃線與第一區的劃線相連

D.劃線分離時，需要把接種環深入到培養基中進行接種

（二）下圖表示細胞融合技術的部分過程，請回答：

（1）若甲、乙細胞是植物細胞，在細胞融合時，首先需將___________消化除去。獲得的丁細胞在植物組織培養是通過平衡___________配比進行調控，從而實現植物器官、組織的發生和形態建成。

（2）若該過程是制備癌胚抗原單克隆抗體的部分過程，實驗中首先將___________注入小鼠體內，然后從產生免疫反應的小鼠脾臟中獲取經免疫的___________細胞，將其與骨髓瘤細胞融合，篩選出___________細胞。

（3）若甲、乙細胞到丙細胞過程是哺乳動物體外受精過程，甲、乙細胞能夠結合的基礎是細胞膜表面有特異性___________功能的蛋白。若丁細胞為囊胚的外表扁平細胞，由其組成的結構稱為___________。

Answer 1

【答案】 含氮物質（氮源）充足的氧氣 單菌落 培養皿 瓊脂糖 B 細胞壁 植物激素 癌胚抗原 B淋巴 雜交瘤 識別 滋養層

【解析】由題干可知該題考查微生物的純化和培養及細胞融合想知識，主要考察考生對知識點的識記、理解掌握程度。

一、（1）因為要分離固氮菌，所以可以選用不加氮源的培養基進行初步篩選。而培養時要將裝有培養液的錐形瓶放置在搖床上振蕩培養，其目的是為細菌的生長提供充足的氧氣。

（2）用于篩選高表達量菌株的方法主要有平板劃線法和稀釋涂布平板法，都是為了獲得單菌落，所以經涂布分離可以獲得單菌落。制平板時需要將滅過菌的培養基倒入培養皿中進行凝固。此時所使用的培養基與富集培養時有所不同，添加了一定量的瓊脂，因為富集培養基是液體，而此時的是固體，需要添加凝固劑瓊脂。

（3）在純化過程中，在固體培養基上劃線時，一定要注意嚴格無菌條件，其中接種環采用灼燒滅菌，A錯誤。接種時應在酒精燈火焰附近進行，B正確。劃線時最后一區的劃線與第一區的劃線不能相連，C錯誤。劃線分離時，需要把接種環接觸到培養基中進行接種，而不能深入到培養基中，D錯誤。

二、（1）若甲、乙細胞是植物細胞，在細胞融合時，首先需將具有保護作用的細胞壁用纖維素酶和果膠酶去掉，才能獲得原生質體。獲得的丁細胞即雜種植物細胞在植物組織培養是通過平衡植物激素（主要是生長素和細胞分裂素）配比進行調控，從而實現植物器官、組織的發生和形態建成。

（2）若該過程是制備癌胚抗原單克隆抗體的部分過程，實驗中首先將抗原即癌胚抗原注入小鼠體內，然后從產生免疫反應的小鼠脾臟中獲取經免疫的B淋巴細胞，將其與骨髓瘤細胞融合，篩選出既能產生特異性抗體還能大量增殖的雜交瘤細胞。

（3）若甲、乙細胞到丙細胞過程是哺乳動物體外受精過程，甲、乙細胞能夠結合的基礎是細胞膜表面有特異性識別功能的蛋白。若丁細胞為囊胚的外表扁平細胞，由其組成的結構稱為滋養層細胞，內部是具有發育全能性的內細胞團。