Question

【題目】回答下列（一）（二）小題：

（一）回答與固定化酶相關的問題：

（1）常用固定化果膠酶處理含果膠的污水，其主要優點有___________________，果膠酶可以在_______________等微生物體內找到，酶的固定化方法除了包埋法外，還包括______________、交聯法、共價偶聯法等。

（2）科研人員用海藻酸鈉作為包埋劑來固定小麥酯酶，以硏究固定化酶的相關性質和最佳固定條件。酶活力為固定化酶催化化學反應的總效率，包括酶活性和酶的數量。如圖甲、乙為部分研究結果。分析并回答相關問題

①由圖甲可知，固定化小麥酯酶的最適宜溫度是_______________。

②由圖甲和圖乙可知，酶對有機溶劑不敏感，但對______________和______________非常敏感。

③用固定化酶技術與微生物降解相比，其作用不需要適宜的（_______）

A．溫度 B．酸堿度

C．水分 D．營養

（二）回答與基因工程和動物克隆有關的問題：

（1）可利用______________方法檢測某人體內是否有抗體，從而判斷某人是否被冠狀病毒感染。

（2）上海多家生物公司已研發出冠狀病毒檢測試劑盒。該方法采用RT-PCR技術對病毒抗原進行檢測。2019新型冠狀病毒是RNA病毒，應該先用______________將RNA逆轉錄為cDNA。再設計引物進行PCR擴增檢測。

（3）2020年1月10日，科學家完成病毒基因組測序，經科學家初步研究發現冠狀病毒核衣殼N蛋白具有特異抗原性。因此可用____________獲取目的基因，利用____________與表達載體構建成重組DNA分子。導入經____________處理的受體細菌，誘導表達后分離純化核衣殼N蛋白作為抗原。

（4）將核衣殼N蛋白注射到小鼠體內，獲取經免疫的脾細胞，再與小鼠的_____________融合，經篩選獲得雜交瘤細胞系。再經____________培養法篩選岀雜交瘤細胞株。經體內或體外擴増培養，獲得單克隆抗體。此抗體優點是___________________________________________________。

Answer 1

【答案】酶可以多次利用，使酶和產物實現分離 黑曲霉和蘋果青霉 吸附法 45℃ 高溫 強酸堿 D 抗原-抗體雜交 逆轉錄酶 化學方法合成 限制性核酸內切酶和 DNA 連接酶 氯化鈣 骨髓瘤細胞 克隆（細胞克隆） 特異性強，靈敏度高

【解析】

固定化酶是指用物理學或化學的方法將酶與固相載體結合在一起形成的仍具有酶活性的酶復合物。在催化反應中，它以固相狀態作用于底物，反應完成后，容易與水溶性反應物和產物分離，可被反復使用。基因工程的基本操作步驟主要包括四步：①目的基因的獲取；②基因表達載體的構建；③將目的基因導入受體細胞；④目的基因的檢測與表達。工具：限制酶、DNA連接酶和運載體。

（一）（1）固定化酶的優點：酶可以重復利用，增大利用率；可以實現酶和產物分離，產物純凈率提高；黑曲霉和蘋果青霉可以合成果膠酶；酶的固定化方法：包埋法、吸附法、交聯法、共價偶聯法等。

（2）①由圖甲可知，在45℃時，固定化酶的活力最高，故固定化小麥酯酶的最適宜溫度是45℃；

②由圖甲和圖乙可知，酶在高溫及強酸、強堿條件下酶活力會降低甚至失活，故酶對上述條件非常敏感；

③酶多數是蛋白質，不像細胞類生物需要營養物質維持生命活動。

（二）（1）若檢測某人體內是否有抗體，以此判斷某人是否被病毒感染，在分子水平上可用抗原—抗體雜交方法檢測。

（2）PCR對象為DNA，而2019新型冠狀病毒是RNA病毒，因此提取病毒RNA后要先用逆轉錄酶進行逆轉錄。

（3）因為抗原蛋白的基因序列已知，因此獲取目的基因的方法為化學方法合成或PCR擴增，并將目的基因與經限制酶酶切的載體用DNA連接酶連接，因此構建重組質粒除DNA連接酶外，還需要限制性核酸內切酶；而受體細菌需要用氯化鈣處理，以增加細菌細胞壁的通透性。

（4）經免疫的脾細胞與小鼠的骨髓瘤細胞融合后獲得的是雜交瘤細胞系；要分離出既能無限增殖又能產生特定抗體的雜交瘤細胞株，基本要求是只能來源于一個細胞，此方法又稱克隆培養法；單克隆抗體的優點是特異性強，靈敏度高，可大量制備等。