Question

【題目】編碼蛋白甲的DNA序列（序列甲）由A，B，C，D，E五個(gè)片段組成，編碼蛋白乙和丙的序列由序列甲的部分片段組成，如圖1所示．

回答下列問題：
（1）現(xiàn)要通過基因工程的方法獲得蛋白乙，若在啟動子的下游直接接上編碼蛋白乙的DNA序列（TTCGCTTCT…CAGGAAGGA），則所構(gòu)建的表達(dá)載體轉(zhuǎn)入宿主細(xì)胞后不能翻譯出蛋白乙，原因是 ．
（2）某同學(xué)在用PCR技術(shù)獲取DNA片段B或D的過程中，在PCR反應(yīng)體系中加入了DNA聚合酶、引物等，還加入了序列甲作為 ， 加入了作為合成DNA的原料．
（3）現(xiàn)通過基因工程方法獲得了甲、乙、丙三種蛋白，要鑒定這三種蛋白是否具有刺激T淋巴細(xì)胞增殖的作用，某同學(xué)做了如下實(shí)驗(yàn)：將一定量的含T淋巴細(xì)胞的培養(yǎng)液平均分成四組，其中三組分別加入等量的蛋白甲、乙、丙，另一組作為對照，培養(yǎng)并定期檢測T淋巴細(xì)胞濃度，結(jié)果如圖2．
①由圖2可知，當(dāng)細(xì)胞濃度達(dá)到a時(shí)，添加蛋白乙的培養(yǎng)液中T淋巴細(xì)胞濃度不再增加，此時(shí)若要使T淋巴細(xì)胞繼續(xù)增殖，可采用的方法是 ． 細(xì)胞培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)箱中通常要維持一定的CO2濃度，CO2的作用是 ．
②僅根據(jù)圖、圖2可知，上述甲、乙、丙三種蛋白中，若缺少（填“A”“B”“C”“D”或“E”）片段所編碼的肽段，則會降低其刺激T淋巴細(xì)胞增殖的效果．

Answer 1

【答案】
（1）因?yàn)樵趩�動子的下游接上的編碼蛋白乙的DNA序列,不能啟動
（2）模板DNA,4種脫氧核苷酸
（3）細(xì)胞培養(yǎng)（傳代培養(yǎng)）,維持培養(yǎng)液中的pH,C
【解析】解：（1）因?yàn)樵趩�動子的下游接上的編碼蛋白乙的DNA序列，不能啟動編碼蛋白乙的DNA序列的轉(zhuǎn)錄，因此所構(gòu)建的表達(dá)載體轉(zhuǎn)入宿主細(xì)胞后不能翻譯出蛋白乙．（2）PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因的條件需要：模板DNA、四種脫氧核苷酸、一對引物、熱穩(wěn)定DNA聚合酶（Taq酶）．序列甲作為模板DNA，DNA的原料為4種脫氧核苷酸．（3）①動物細(xì)胞可以通過細(xì)胞培養(yǎng)（傳代培養(yǎng)）繼續(xù)增殖．細(xì)胞培養(yǎng)過程中，需要?dú)怏w環(huán)境，其中氣體CO2的作用是維持培養(yǎng)液中的pH．

②分析坐標(biāo)圖：對比甲和乙蛋白刺激T淋巴細(xì)胞增殖情況發(fā)現(xiàn)：最終效果相當(dāng)，只是增殖時(shí)間不同，可以推斷出A、E片段編碼的肽段不會降低T淋巴細(xì)胞增殖效果．將丙蛋白分別與甲和乙蛋白刺激T淋巴細(xì)胞增殖情況比較發(fā)現(xiàn)：丙蛋白降低了T淋巴細(xì)胞增殖．丙基因與甲和乙基因相比較，缺少了一段C基因，也就是說若缺少C片段所編碼的肽段，則會降低其刺激T淋巴細(xì)胞增殖的效果．

故答案為：（1）因?yàn)樵趩�動子的下游接上的編碼蛋白乙的DNA序列，不能啟動（2）模板DNA 4種脫氧核苷酸（3）細(xì)胞培養(yǎng)（傳代培養(yǎng)） 維持培養(yǎng)液中的pH（4）C

理清動物細(xì)胞培養(yǎng)的過程：