Question

【題目】Mse Ⅰ、Pst Ⅰ、EcoR Ⅰ三種限制酶的識(shí)別序列及切割位點(diǎn)分別是GAAT↓TAATTC、C↓TGCAG、G↓AATTC,如圖1、圖2中箭頭表示相關(guān)限制酶的酶切點(diǎn).

若要用如圖質(zhì)粒和外源DNA構(gòu)建重組質(zhì)粒,需要對(duì)質(zhì)粒進(jìn)行改造，構(gòu)建新的限制酶切位點(diǎn)。在構(gòu)建新的限制酶切位點(diǎn)的過程中需要使用的酶是()

A. 限制酶PstⅠ、DNA聚合酶、DNA連接酶

B. 限制酶EcoRⅠ、DNA聚合酶、DNA連接酶

C. 限制酶EcoRⅠ、限制酶PstⅠ、DNA聚合酶

D. 限制酶PstⅠ、限制酶EcoRⅠ、DNA連接酶

Answer 1

【答案】B

【解析】分析圖2可知，含目的基因的外源DNA中含有限制酶PstⅠ、MseⅠ、EcoRⅠ的切割位點(diǎn)，其中EcoRⅠ酶的切割位點(diǎn)位于目的基因中。因此構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)。不能用EcoRⅠ酶切割，應(yīng)該用限制酶PstⅠ、MseⅠ進(jìn)行切割；為了保證切割的質(zhì)粒與目的基因露出的粘性末端相同，在對(duì)質(zhì)粒進(jìn)行改造時(shí)，應(yīng)該將限制酶EcoRⅠ的切割位點(diǎn)改造成限制酶MseⅠ的切割位點(diǎn)；因此，首先需要用限制酶EcoRⅠ切割，其次需要用DNA聚合酶將相應(yīng)的脫氧核苷酸序列連接上去，最后再用DNA連接酶連接形成限制酶MseⅠ的切割位點(diǎn)，所以B選項(xiàng)正確。