Question

【題目】支原體是一種嚴重危害牛養(yǎng)殖業(yè)的病原體，在全球各地域廣泛分布，能夠造成肺炎、乳腺炎、耳炎、角膜結膜炎、關節(jié)炎等多種疾病，還能導致母牛流產與不孕，且發(fā)病率很高。研究表明，VspX蛋白是支原體表面的一種蛋白，科研人員通過制備抗VspX蛋白單克隆抗體來進行相關研究。請回答下列問題：

（1）將等量的純化VspX蛋白分別注射到5組生長狀況相同的小鼠體內，經(jīng)過二次免疫后，測定小鼠抗VspX抗似的免疫效果，根據(jù)免疫效果，取__________組小鼠用于后面的融合實驗。

（2）在融合實驗開始前三天，對該組小鼠再次注射VspX蛋白，目的是____________________。

（3）從小鼠的脾臟中獲取相應細胞與_______________融合，用選擇培養(yǎng)基進行篩選。

（4）一段時間后，將篩選得到的雜交瘤細胞接種到多孔培養(yǎng)板上，進行抗體陽性檢測。

（5）將陽性反應強的細胞經(jīng)__________酶處理，制成細胞懸液，并置于__________（裝置）中進行擴大培養(yǎng)。該裝置中的作用是________________________________________。

（6）提取抗VspX單克隆抗體與不同抗原進行雜交檢測，結果如圖，該結果表明，抗VspX單克隆抗體的特點是_____________________。

Answer 1

【答案】免疫效果最好的 刺激機體產生更多的漿細胞 骨髓瘤細胞 胰蛋白 二氧化碳 培養(yǎng)箱維持培養(yǎng)液的pH值 靈敏度高，特異性強

【解析】

單克隆抗體的制備：

（1）制備產生特異性抗體的B淋巴細胞：向免疫小鼠體內注射特定的抗原，然后從小鼠脾內獲得相應的B淋巴細胞。

（2）獲得雜交瘤細胞

①將鼠的骨髓瘤細胞與脾細胞中形成的B淋巴細胞融合；

②用特定的選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細胞，該雜種細胞既能夠增殖又能產生抗體。

（3）克隆化培養(yǎng)和抗體檢測；

（4）將雜交瘤細胞在體外培養(yǎng)或注射到小鼠腹腔內增殖；

（5）提取單克隆抗體：從細胞培養(yǎng)液或小鼠的腹水中提取；

（6）單克隆抗體的優(yōu)點：特異性強，靈敏度高，能大量制備。

（1）VspX蛋白作為抗原注射到小鼠體內，使小鼠產生特異性免疫應答。要選取免疫效果最強的組別用于后續(xù)融合實驗。

（2）為了使刺激機體產生更多的漿細胞，對該組小鼠再次注射抗原，加強免疫。

（3）用PEG（聚乙二醇）使小鼠的脾臟細胞與骨髓瘤細胞融合，再通過選擇培養(yǎng)基進行篩選得到雜交瘤細胞。

（5）加入胰蛋白酶使細胞分散開，制成細胞懸液，培養(yǎng)動物細胞時，要置于二氧化碳培養(yǎng)箱中，該裝置中的CO2是為了維持培養(yǎng)液的pH值。

（6）實驗結果表明，抗VspX單克隆抗體與1、2結合明顯，不能與3、4結合，具有很強的靈敏度和特異性。