Question

【題目】藥物敏感試驗簡稱藥敏試驗，旨在了解病原微生物對各種抗生素的敏感程度，以指導臨床合理選用抗生素。紙片擴散法（Kirby-Bauer test）是藥敏試驗一種常用的方法，它將含有定量抗菌藥物的紙片貼在已接種測試菌的瓊脂平板上，紙片所含的藥物吸取平板中的水分溶解后便不斷向紙片周圍區域擴散，形成遞減的梯度濃度，在紙片周圍抑菌濃度范圍內的細菌生長被抑制，形成透明的抑菌圈。

（平板的制備）

（1）關于藥敏試驗所用的瓊脂平板制備過程，正確的順序是_______

A. 稱量、溶解、定容、調pH、倒平板、滅菌

B. 稱量、溶解、調pH、定容、倒平板、滅菌

C. 稱量、溶解、定容、調pH、滅菌、倒平板

D. 稱量、溶解、調pH、定容、滅菌、倒平板

（2）培養基的滅菌條件應該設定為__________

A. 0.05kg/cm2，62℃，15~30min B. 0.05kg/cm2，121℃，15~30min

C. 1.05kg/cm2，62℃，15~30min D. 1.05kg/cm2，121℃，15~30min

（測試菌接種）

（3）若使用紙片擴散法進行藥敏試驗，在平板制備及測試菌接種環節，無需使用的工具是________

（抑菌圈觀察）

某研究小組將含有相同濃度抗生素I~IV的四個紙片分別貼放在生長有測試菌的瓊脂平板上，在合適的溫度條件下孵育16h，結果如圖所示：

（4）MIC是藥敏試驗中評價抗生素藥效的常用指標，其定義為某種抗生素對測試菌的最低抑制濃度。根據上圖的試驗結果可知，對于該試驗所用測試菌而言，抗生素I的MIC_________（選填“大于”“小于”或“等于”）抗生素III的MIC。

（5）在相關試驗操作均嚴謹規范的情況下，在含有抗生素IV的紙片周圍出現了較大的抑菌圈，抑菌圈中存在有若干個測試菌的菌落。試對上述現象的成因作出_____________________

Answer 1

【答案】C D D 大于 抗生素IV 對于野生型測試菌具有較強的抑制作用，但測試菌中已經出現能抵抗抗生素IV的抗性突變株

【解析】

1．制備牛肉膏蛋白胨固體培養基其基本過程為計算、稱量、溶化、調pH、滅菌、倒平板。
2．純化大腸桿菌（1）原理：在培養基上將細菌稀釋或分散成單個細胞，使其長成單個的菌落，這個單個菌落就是一個純化的細菌菌落。（2）微生物常見的接種的方法①平板劃線法：將已經熔化的培養基倒入培養皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養。在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數逐漸減少，最后可能形成單個菌落。②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經過大量稀釋后，均勻涂布在培養皿表面，經培養后可形成單個菌落。

（1）培養基制備的基本過程為計算、稱量、溶化、調pH、滅菌、倒平板，因此關于藥敏試驗所用的瓊脂平板制備過程，正確的順序稱量、溶解、定容、調pH、滅菌、倒平板，C正確。
（2）培養基一般采用高壓蒸汽滅菌，其滅菌條件一般在壓力為100 kPa，溫度為121℃的條件下，維持15～30 min，而100kPa相當于1.05kg/cm2，D正確。
（3）ABC、該實驗中，測試菌接種需要利用涂布平板的方法，因此首先需要利用培養皿倒平板，然后用涂布器涂布平板，而涂布器滅菌時需要酒精燈燃燒殘余的酒精，ABC正確；
D、平板劃線法需要使用接種環，該實驗無需使用，D錯誤。
（4）MIC是藥敏試驗中評價抗生素藥效的常用指標，其定義為某種抗生素對測試菌的最低抑制濃度。分析圖解可知，抗生素Ⅰ的透明圈明顯小于抗生素Ⅲ，因此對于該試驗所用測試菌而言，抗生素I的MIC大于抗生素III的MIC。
（5）在相關試驗操作均嚴謹規范的情況下，在含有抗生素IV的紙片周圍出現了較大的抑菌圈，抑菌圈中存在有若干個測試菌的菌落。這種現象可能是由于抗生素IV 對于野生型測試菌具有較強的抑制作用，但測試菌中已經出現能抵抗抗生素IV 的抗性突變株。