Question

【題目】硒是一種生命必需的微量元素。亞硒酸鈉對細菌的生長有明顯的毒害作用，土壤中的一些富硒細菌可將其還原為紅色單質(zhì)硒。下圖為土壤中富硒細菌的篩選和純化過程。回答下列問題。

（1）若②中出現(xiàn)_________的現(xiàn)象，則說明培養(yǎng)基中的亞硒酸鈉被細菌還原。

（2）梯度稀釋的目的是_________。 將細菌從④接種至⑤應(yīng)采用_________法。

（3）固定化富硒菌一般采用_________法。采用凝膠色譜法分離純化還原亞硒酸鈉的酶時，先從層析柱中洗脫出來的是相對分子質(zhì)量較___________的蛋白質(zhì)。

（4）研究人員篩選出--種只有較強富硒能力的菌株，現(xiàn)欲通過觀察菌落來判斷菌株對亞硒酸鈉的耐受值，請將下列實驗補充完整:

①配制系列濃度梯度的亞硒酸鈉________（填“液體”或“固體”）培養(yǎng)基；

②向培養(yǎng)基中分別接種___________的該菌株菌液，在適宜條件下培養(yǎng)一段時間；

③觀察菌落生長情況，________的培養(yǎng)基對應(yīng)的最高亞硒酸鈉濃度即為該菌株的最高耐受值。

Answer 1

【答案】培養(yǎng)基變紅 使聚集在一起的細胞分散成單個細胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個的菌落 平板劃線 包埋 大 固體 等量 有菌落生長

【解析】

微生物的實驗室培養(yǎng)，常用到培養(yǎng)基，培養(yǎng)基，是指供給微生物、植物或動物（或組織）生長繁殖的，由不同營養(yǎng)物質(zhì)組合配制而成的營養(yǎng)基質(zhì)。一般都含有碳水化合物、含氮物質(zhì)、無機鹽（包括微量元素）、維生素和水等幾大類物質(zhì)。培養(yǎng)基根據(jù)培養(yǎng)功能可分為基礎(chǔ)培養(yǎng)基、選擇培養(yǎng)基、加富培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基等。選擇培養(yǎng)基是指一類根據(jù)特定微生物的特殊營養(yǎng)要求或其對某理化因素抗性的原理而設(shè)計的培養(yǎng)基。具有只允許特定的微生物生長，而同時抑制或阻止其他微生物生長的功能。凝膠色譜法（分配色譜法）原理：分子量大的分子通過多孔凝膠顆粒的間隙，路程短，流動快；分子量小的分子穿過多孔凝膠顆粒內(nèi)部，路程長，流動慢。微生物計數(shù)時，首先將待測樣品制成均勻的系列稀釋液（梯度稀釋），盡量使樣品中的微生物細胞分散開，使成單個細胞存在。

（1）培養(yǎng)液中有亞硒酸鈉，若培養(yǎng)基中有富硒細菌，可將亞硒酸鈉還原為紅色單質(zhì)硒。

（2）梯度稀釋的目的是使聚集在一起的細胞分散成單個細胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個的菌落。 將細菌從④接種至⑤，為挑取單菌落接種至另一培養(yǎng)基，應(yīng)采用平板劃線法。

（3）細菌體積大，一般不容易從包埋材料中漏出，因此固定化富硒菌一般采用包埋法。采用凝膠色譜法分離純化還原亞硒酸鈉的酶時，先從層析柱中洗脫出來的是相對分子質(zhì)量較大的蛋白質(zhì)。

（4）①題干欲通過觀察菌落來判斷菌株對亞硒酸鈉的耐受值，因此應(yīng)配制系列濃度梯度的亞硒酸鈉固體培養(yǎng)基。②利用實驗設(shè)計的等量原則，向培養(yǎng)基中分別接種等量的該菌株菌液，在適宜條件下培養(yǎng)一段時間。③因為亞硒酸鈉對細菌的生長有明顯的毒害作用，因此觀察菌落生長情況，有菌落生長的培養(yǎng)基對應(yīng)的最高亞硒酸鈉濃度即為該菌株的最高耐受值。