Question

【題目】纖維素是一種能生物降解的可再生的能源物質(zhì)，牛的瘤胃中生活有纖維素分解菌，從而牛能利用纖維素。某小組從牛糞便中篩選出能夠降解纖維素的菌株，并對(duì)纖維素酶進(jìn)行測(cè)定，流程如下圖所示。請(qǐng)回答下列問題：

（1）分解秸稈中纖維素的微生物能分泌纖維素酶，該酶至少包括三種組分，其中葡萄糖苷酶能將______。

（2）牛糞便樣品通過富集培養(yǎng)可增加_________，以確保能從樣品中分離得到目的菌。

（3）將富集培養(yǎng)后的牛糞便混合菌液適當(dāng)稀釋后涂布在以________作為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基上，放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。培養(yǎng)完成后滴加______染色，觀察培養(yǎng)基上是否產(chǎn)生_________，再通過比較其大小，初步獲得目的菌株。從稀釋倍數(shù)為103的試管中吸取0.1mL樣液涂布到平板上，培養(yǎng)后發(fā)現(xiàn)平板上菌落過于密集，最可能的原因是_________。

（4）測(cè)定纖維素酶時(shí)，一般采用的方法是_______________ 。

Answer 1

【答案】纖維二糖分解成葡萄糖 纖維素分解菌的濃度 纖維素 剛果紅 透明圈 樣液中細(xì)菌濃度較高，稀釋倍數(shù)不夠 濾紙分解實(shí)驗(yàn)（對(duì)纖維素酶分解濾紙等纖維素后所產(chǎn)生的葡萄糖進(jìn)行定量的測(cè)定）

【解析】

分離中纖維素分解菌的實(shí)驗(yàn)流程是:取樣→選擇培養(yǎng)→梯度稀釋→將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上→挑選產(chǎn)生透明圈的菌落。纖維素分解菌可以產(chǎn)生纖維素酶，纖維素酶是一種復(fù)合酶，可以把纖維素分解為纖維二糖，進(jìn)一步分解為葡萄糖供微生物利用，故在用纖維素作為唯一碳源的培養(yǎng)基中進(jìn)行選擇培養(yǎng)，選擇培養(yǎng)的目的是增加纖維素分解菌的濃度，該培養(yǎng)基上其他微生物則不能生長(zhǎng)。在培養(yǎng)基中加入剛果紅，可與培養(yǎng)基中的纖維素形成紅色復(fù)合物，當(dāng)纖維素被分解后，紅色復(fù)合物不能形成，培養(yǎng)基中會(huì)出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈，從而可篩選纖維素分解菌。挑取菌落，用平板劃線法或稀釋涂布平板法分別接種到固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)，進(jìn)一步分離純化得到單菌落。

（1）分解秸稈中纖維素的微生物能分泌纖維素酶，該酶至少包括三種組分，C1酶、Cx酶以及葡萄糖苷酶，其中葡萄糖苷酶能將纖維二糖分解成葡萄糖。

（2）牛糞便樣品通過富集培養(yǎng)可增加纖維素分解菌的濃度，以確保能從樣品中分離得到目的菌。

（3）將富集培養(yǎng)后的牛糞便混合菌液適當(dāng)稀釋后涂布在以纖維素作為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基上，放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。培養(yǎng)完成后滴加剛果紅染色，觀察培養(yǎng)基上是否產(chǎn)生透明圈，再通過比較其大小，初步獲得目的菌株。從稀釋倍數(shù)為103的試管中吸取0.1mL樣液涂布到平板上，培養(yǎng)后發(fā)現(xiàn)平板上菌落過于密集，最可能的原因是樣液中細(xì)菌濃度較高，稀釋倍數(shù)不夠。

（4）測(cè)定纖維素酶時(shí)，一般采用的方法是對(duì)纖維素酶分解濾紙等纖維素后所產(chǎn)生的葡萄糖進(jìn)行定量的測(cè)定。