Question

【題目】某研究小組進行了甲型H1N1流感病毒的疫苗研制工作，如圖為他們前期研究工作的簡要操作流程圖：

(1)實驗步驟①所代表的反應過程是________；在步驟②之間擴增H基因常采用的方法是___________。

(2)步驟②構建重組表達載體A和重組表達載體B必須使用的酶是____________。

(3)構建重組表達載體時，一般需要將H基因與載體結合，常用作基因工程載體的是________；在檢測受體細胞中是否已經導入目的基因時，常常要借助載體上________的表達。

Answer 1

【答案】逆轉錄 PCR(或多聚酶鏈式反應)技術 限制性核酸內切酶和DNA連接酶 質粒(或病毒) 標記基因(或抗生素抗性基因)

【解析】

基因工程：按照人們的意愿，把一種生物的個別基因復制出來，加以修飾改造，然后放到另一種生物的細胞里，定向地改造生物的遺傳性狀；基因工程的步驟：①提取目的基因，②目的基因與運載體結合（形成重組DNA分子），③將重組DNA分子導入受體細胞，④目的基因的表達與檢測；基因工程技術的關鍵是構建基因表達載體，它使目的基因在受體細胞中穩定存在，并且可以傳給下一代，同時使目的基因表達并發揮作用；基因工程中限制性核酸內切酶和DNA連接酶是構建重組質粒必需的工具酶。

（1）實驗步驟①RNA→DNA所代表的反應過程是逆轉錄；在步驟②之前擴增H基因常采用的方法是PCR技術(或多聚酶鏈式反應技術)；

（2）需要限制酶來切割以獲取目的基因，同時需要相同的限制酶切割運載體以獲取與目的基因相同的黏性末端，再通過DNA連接酶連接目的基因和運載體，故步驟②構建重組表達載體A和重組表達載體B必須使用的酶是限制酶(限制性內切酶)和DNNA連接酶；

（3）構建重組表達載體時，一般需要將H基因與載體結合，常用做基因工程載體的是質粒(或病毒)；在檢測受體細胞中是否已經導入目的基因時，常常要借助載體上標記基因(或抗生素抗性基因)的表達。