Question

【題目】（一）回答下列有關生物技術實踐的問題：

（1）某公司研發的一種培養大腸桿菌的培養基配方為：蛋白胨10克、葡萄糖5克、蔗糖5克、KH2PO4 2克、顯色劑（伊紅美藍）0. 2g、瓊脂12克，將上述物質溶解后，用蒸餾水定容到1000mL。根據用途劃分，該培養基屬于_______培養基，若要分離能分解尿素的細菌，需對培養基作出的兩項調整是___________、___________。

（2）對同一濃度的脲酶生產菌稀釋液，分別用血細胞計數板計數和稀釋涂布平板法計數，若不存在實驗誤操作，則前者的數量___________（填“多于”、“等于”或“小于”）后者，其原因是___________________。

（3）某科研工作者用特殊的化學物質將脲酶包裹，遇水后包裹層很快溶解，釋放出來的酶迅速發揮催化作用。請說明這是否運用了酶的固定化技術及其理由：_____________________________。

（二）下圖是治療性克隆時獲取病人胚胎干細胞的過程。

（1）圖示方法一和方法二都使用了去核卵母細胞，主要是因為___________。在培養過程中除了添加糖、氨基酸等必要的營養成分外，往往還添加動物血清，原因是__________________________。

（2）將分離出的胚胎干細胞放入有分化誘導因子的培養液中，誘導其分化成所需類型細胞或器官，完成該過程的實質是____。在單克隆抗體制備過程中，誘導漿細胞與骨髓瘤細胞融合，此過程需要兩次篩選，這兩次篩選出的目標細胞分別為___；_______。

Answer 1

【答案】鑒別 將蛋白胨換為尿素， 瓊脂換成瓊脂糖 多于 前者產脲酶菌絲分散的或活菌和死菌一起計數，后者存在多個產脲酶菌形成一個菌落的情況或只計數活菌。 未運用酶的固定化技術，因為酶未固定在不溶于水的載體上，也不能重復利用。 卵母細胞的細胞質中有促進核基因表達的物質； 動物血清營養成分比較齊全，可以彌補人工培養基的不足。 基因的選擇性表達； 雜交瘤細胞； 能產生特異性抗體的雜交瘤細胞。

【解析】

1、微生物培養基一般都含有水、碳源、氮源、無機鹽，此外還要滿足微生物生長對pH、特殊營養物質以及氧氣的要求。
2、由于細菌分解在尿素的過程中合成脲酶，脲酶將尿素分解成氨，會使培養基堿性增強，PH升高，所以可以用檢測pH的變化的方法來判斷尿素是否被分解，可在培養基中加入酚紅指示劑，尿素被分解后產生氨，PH升高，指示劑變紅。

（一）

（1）分析培養基成分可知，培養基中加入顯色劑，因此根據用途可以判斷，該培養基屬于鑒別培養基；培養基中的氮源為蛋白胨，若要分離能分解尿素的細菌需將培養基中蛋白胨換成尿素，將瓊脂換成瓊脂糖。

（2）對同一濃度的脲酶生產菌稀釋液，分別用血細胞計數板計數和稀釋涂布平板法計數，若不存在實驗誤操作，則前者的數多于后者，其原因是前者產脲酶菌絲分散的或活菌和死菌一起計數，后者存在多個產脲酶菌形成一個菌落的情況或只計數活菌。。

（3）某科研工作者用特殊的化學物質將脲酶包裹，遇水后包裹層很快溶解，釋放出來的酶迅速發揮催化作用。此過程未運用酶的固定化技術，因為酶未固定在不溶于水的載體上，也不能重復利用。

（二）

（1）方法一和方法二都使用了去核卵母細胞，主要是因為卵母細胞的細胞質可以給體細胞的細胞核提供表達全能性的環境。在培養過程中除了添加糖、氨基酸等必要的營養成分外，往往還添加動物血清，原因是動物血清營養成分比較齊全，可以彌補人工培養基的不足。

（2）將分離出的胚胎干細胞放入有分化誘導因子的培養液中，誘導其分化成所需類型細胞或器官，完成該過程的實質是基因的選擇性表達。在單克隆抗體制備過程中，誘導漿細胞與骨髓瘤細胞融合，此過程需要兩次篩選，這兩次篩選出的目標細胞分別為雜交瘤細胞和能產生特異性抗體的雜交瘤細胞。