Question

【題目】酵母菌的蛋白質可作為飼料蛋白的來源，有些酵母菌能以工業廢甲醇作為碳源，研究人員擬從土壤樣品中分離出可利用工業廢甲醇的酵母菌，這樣既能減少污染又可變廢為寶。下圖為主要操作流程示意圖。

回答下列問題：

（1）配制培養基時，按照培養基配方準確稱量各組分，將其溶解、定容后，調節培養基的____，及時對培養基進行分裝，并進行高壓蒸汽滅菌：在加熱排除高壓鍋內原有的____后，將高壓鍋密閉，繼續加熱，通常在____的條件下，維持15-30min，可達到良好的滅菌效果。

（2）取步驟②中梯度稀釋后的適量液體加入無菌培養皿，然后將高壓蒸汽滅菌后的培養基冷卻至____（25℃/50℃/80℃）左右時倒入培養皿混勻（步驟⑧），冷凝后將培養皿倒置，在適宜的條件下培養一段時間。

（3）挑取平板中長出的單菌落，按步驟④所示進行劃線純化，下列敘述合理的是____。

a．為保證無菌操作，接種針、接種環使用前都必須滅菌

b．挑取菌落時，應挑取多個菌落，分別測定酵母細胞中甲醇的含量

c．劃線時不能劃破培養基表面，以確保能正常形成菌落

d．第二區以后的劃線起始端要與上一區的劃線的末端相連接，最后一區的劃線末端不能與第一區的劃線相連

（4）步驟⑤的培養中，應加入 ___作為碳源，并加入適量的氮源、無機鹽和水等成分。為監測發酵罐中酵母菌活細胞的密度，取2mL發酵液稀釋1000倍后，加入等體積臺盼藍染液染色，用如圖所示的計數室規格為25x16型的血細胞計數板計數，要達到每毫升4x109個活酵母菌細胞的預期密度，理論上，圖中標號①～⑤五個中格里的呈____色的酵母菌細胞總數應不少于____個。

Answer 1

【答案】pH 冷空氣 （壓力為）100kPa、（溫度為）121℃ 50℃ a、c、d 工業廢甲醇 無 40

【解析】

1、微生物常見的接種的方法：①平板劃線法：將已經熔化的培養基倒入培養皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養。在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數逐漸減少，最后可能形成單個菌落。

②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經過大量稀釋后，均勻涂布在培養皿表面，經培養后可形成單個菌落。

2、分析題圖：①稱量土樣，里面含有需要分離的酵母菌；②表示梯度稀釋和涂布平板；③④表示平板劃線法，進行純化培養；⑤表示擴大培養，獲得更多的酵母菌。

（1）配制培養基時，按照培養基配方準確稱量、溶化，調節培養基的pH，及時對培養基進行分裝，高壓蒸汽滅菌。在加熱排除高壓鍋內原有的冷空氣后，將高壓鍋密閉，繼續加熱，通常在（壓力為）100kPa、（溫度為）121℃的條件下，維持15-30min，可達到良好的滅菌效果。

（2）倒平板需要將培養基冷卻至50℃進行。

（3）a、接種針、接種環使用前都必須滅菌，做到無菌操作，a正確；

b、挑取菌落時，應挑取多個菌落，分別測定培養液中，而不是細胞內甲醇的含量，b錯誤；

c、劃線時應避免劃破培養基表面，否則大量酵母菌聚集，不能形成正常菌落，c正確；

d、第二區域以后的劃線區域的菌種來源于上一區域的末端，所以第二區以后的劃線起始端要與上一區的劃線的末端相連接，并且最后一區的劃線末端不能與第一區的劃線相連，d正確，以便于分離菌落。

故選acd。

（4）本實驗的目的是分離出可利用工業廢甲醇的酵母菌，所以應該以甲醇作為碳源，活細胞膜具有選擇透過性，經等體積臺盼藍染液染色，無色細胞才計數；為監測酵母的活細胞密度，將發酵液稀釋1000倍后，經等體積臺盼藍染液染色，用25×16型血細胞計數板計數5個中格中的細胞數，達到每毫升4×109個活細胞的預期密度，則n÷80×400÷（0.1×103）×2000=4×109，則5個中方格中無色酵母菌不少于40。