Question

【題目】為了提高水稻的抗倒伏能力，科研人員從其他植物中得到矮桿基因C（圖1），將其與質粒（圖2）重組，再借助農桿菌導入水稻中。

根據基因工程的有關知識，回答下列問題：

（1）用__________構建重組質粒；一般使用__________將重組質粒導入農桿菌。

（2）用含C基因的農桿菌侵染水稻的__________，將C基因導入細胞；在培養基中添加__________，篩選被轉化的水稻細胞；要得到相應的水稻植株，要利用__________。

（3）用__________檢測C基因是否整合到染色體上；此外，還需要在個體水平上進行檢測。如果檢測顯示C基因整合到染色體上，但水稻并沒有矮化，請分析可能的原因：__________；__________。（至少答兩點）

Answer 1

【答案】限制性核酸內切酶EcoRI和DNA連接酶 感受態法/Ca2+處理法 愈傷組織 潮霉素 植物組織培養技術 分子雜交方法/DNA分子探針法 整合到染色體上的C基因沒有表達（轉錄） C基因在水稻細胞中的表達產物沒有相應的功能

【解析】

分析題圖：圖1矮桿基因C的兩端有EcoRI酶識別位點，圖2質粒有EcoRI和BamHI酶識別位點，所以對基因C和質粒用同一種酶EcoRI酶切割，再用DNA連接酶連成重組質粒，通過感受態法將重組質粒導入農桿菌中，讓含C基因的農桿菌侵染水稻。

（1）構建重組質粒時，應用同一種酶限制性核酸內切酶EcoRI分別切割目的基因和運載體，并用DNA連接酶連成重組質粒。用感受態法/Ca2+處理法將重組質粒導入農桿菌。

（2）用含C基因的農桿菌侵染水稻的愈傷組織，將C基因導入細胞；根據重組質粒中的抗生素基因，在培養基中添加潮霉素，篩選被轉化的水稻細胞；利用植物組織培養技術，將轉基因水稻細胞培育成轉基因植株。

（3）檢測C基因是否整合到染色體上采用分子雜交方法/DNA分子探針法。如果檢測顯示C基因整合到染色體上，但水稻并沒有矮化，則可能是整合到染色體上的C基因沒有表達（轉錄）或C基因在水稻細胞中的表達產物沒有相應的功能。