Question

【題目】蘋果切開一段時間后會發生褐變，原因是受損細胞中的多酚類物質會在多酚氧化酶（PPO）催化下迅速氧化。研究人員試圖通過RNA干擾技術，抑制PPO的合成，從而培育不會褐變的蘋果。如圖表示RNA干擾技術的原理。

回答下列問題

（1）RNA干擾技術需要先合成能轉錄出特殊雙鏈RNA的目的基因，構建______后，通常利用______法將其導入蘋果葉肉細胞并進行表達。圖中Dicer酶的作用類似限制酶，其專一性體現在能______并將其切割成較小的片段，切割后一段短小RNA參與形成誘導沉默復合體，特異性地引起PPO的轉錄產物降解。可見，RNA干擾技術通過影響遺傳信息的______過程抑制蛋白質合成。

（2）利用______技術可將成功導入目的基因的蘋果葉肉細胞培育成完整植株。這一技術的原理是______。要誘導離體的葉肉細胞脫分化形成______組織，培養基中應含有______（成分）。

Answer 1

【答案】基因表達載體 農桿菌轉化 識別雙鏈RNA上特定的核苷酸序列 翻譯 植物組織培養 植物細胞的全能性 愈傷 無機營養成分、有機營養成分、激素、瓊脂等

【解析】

基因工程技術的基本步驟：
（1）目的基因的獲取：方法有從基因文庫中獲取、利用PCR技術擴增和人工合成。
（2）基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等。
（3）將目的基因導入受體細胞：根據受體細胞不同，導入的方法也不一樣。將目的基因導入植物細胞的方法有農桿菌轉化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因導入微生物細胞的方法是感受態細胞法。
（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA--分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質--抗原-抗體雜交技術。個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

（1）由圖示分析可知，RNA干擾技術需要先合成能轉錄出特殊雙鏈RNA的目的基因，構建基因表達載體后，通常利用農桿菌轉化法將其導入蘋果葉肉細胞并進行表達。圖中Dicer酶的作用類似限制酶，其專一性體現在能識別雙鏈RNA上特定的核苷酸序列并將其切割成較小的片段，切割后一段短小RNA參與形成誘導沉默復合體，特異性地引起PPO的轉錄產物降解。可見，RNA干擾技術通過影響遺傳信息的翻譯過程抑制蛋白質合成。

（2）利用植物組織培養技術可將成功導入目的基因的蘋果葉肉細胞培育成完整植株。這一技術的原理是植物細胞的全能性。要誘導離體的葉肉細胞脫分化形成愈傷組織，培養基中應含有無機營養成分、有機營養成分、激素、瓊脂等。