Question

【題目】內皮素（ET）是一種多肽，它有促進血管收縮和平滑肌細胞增殖等作用。內皮素主要通過與靶細胞膜上的內皮素受體（ETA）結合而發揮生理效應。科研人員通過構建基因的表達載體，實現ETA基因在細胞中高效表達，其過程如下（圖中SNAP基因是一種熒光蛋白基因，限制酶ApaⅠ的識別序列為C↓CCGGG，限制酶XhoⅠ的識別序列為C↓TCGAG）。請分析回答：

（1）完成過程①需要的酶是______________；過程①的最后階段要將反應體系的溫度升高到95℃，其目的是使RNA鏈和___________鏈分開。

（2）過程③中，限制酶XhoⅠ切割DNA，使_____________________鍵斷開，形成目的基因的黏性末端是_____________（選填“TCGA-”或“-TCGA”）。用______種限制酶切割，獲得不同的黏性末端，其主要目的是使目的基因定向連接到載體上（或防止目的基因和質粒自身環化）。

（3）過程⑥是否成功導入，可將大腸桿菌培養在含有________________的培養基中進行篩選。

（4）利用SNAP基因與ETA基因結合構成融合基因，目的是通過熒光顯微檢測間接判斷ETA基因能否__________。

（5）內皮素能刺激黑色素細胞的分化、增殖并激活酪氨酸酶的活性，從而使黑色素急劇增加。美容時可以利用注射ETA達到美白祛斑效果，這是因為ETA能與內皮素結合，減少了內皮素與黑色素細胞膜上_____________的結合，抑制了黑色素細胞的增殖和黑色素的形成。

Answer 1

【答案】逆轉錄酶（反轉錄酶） cDNA（DNA、脫氧核苷酸） 磷酸二酯 TCGA-（或-AGCT） 兩（2、不同） 氨芐青霉素 表達 特異性受體（受體、內皮素受體）

【解析】

分析題圖，①②③表示反轉錄法獲得目的基因的過程，④表示構建基因表達載體，⑤表示限制酶切割質粒，⑥表示重組質粒導入受體細胞，⑦表示目的基因的檢測。

（1）過程①是逆轉錄過程，需要逆轉錄酶的催化；過程①的最后階段要將反應體系的溫度升高到95℃，其目的是使RNA鏈和cDNA鏈分開。

（2）過程③中，限制酶XhoⅠ切割DNA，使得DNA中的磷酸二酯鍵斷開，根據題意，限制酶XhoⅠ的識別序列為C↓TCGAG，則切割后形成目的基因的黏性末端是-AGCT。圖中顯示利用了兩種限制酶切割目的基因和載體，從而獲得了不同的黏性末端，可以防止目的基因和載體發生自身環化，使目的基因定向連接到載體上。

（3）據圖可知，重組質粒中氨芐青霉素抗性基因完整，故要確定過程⑥是否成功導入，可依靠標記基因進行篩選，將大腸桿菌培養在含有氨芐青霉素的培養基中進行篩選。

（4）利用SNAP基因與ETA基因結合構成融合基因，目的是通過熒光顯微檢測間接判斷ETA基因能否表達。

（5）據題意，內皮素主要通過與靶細胞膜上的內皮素受體（ETA）結合而發揮生理效應。內皮素能刺激黑色素細胞的分化、增殖并激活酪氨酸酶的活性，從而使黑色素急劇增加。美容時可以利用注射ETA達到美白祛斑效果，這是因為ETA能與內皮素結合，減少了內皮素與黑色素細胞膜上特異性受體的結合，抑制了黑色素細胞的增殖和黑色素的形成。