Question

【題目】人血清白蛋白（HSA）是血漿中含量最豐富的蛋白質(zhì)，在維持血漿滲透壓、抗凝血等方面起著重要作用，具有重要的醫(yī)用價(jià)值。如圖是用基因工程技術(shù)獲取重組HSA（rHSA）的兩條途徑。

（1）為獲取HSA基因，首先要提取人血細(xì)胞中的mRNA，利用_______法合成cDNA，再利用PCR技術(shù)進(jìn)行快速擴(kuò)增，在這一過(guò)程中，需要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根據(jù)這一序列合成_______，PCR過(guò)程中，溫度降低到55℃的目的是_________________。

（2）構(gòu)建在水稻胚乳細(xì)胞內(nèi)特異表達(dá)rHSA的載體時(shí)，需要選擇水稻胚乳細(xì)胞啟動(dòng)子，而不能選擇其他物種和組織細(xì)胞的啟動(dòng)子，原因可能是_________________。

（3）在利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化水稻受體細(xì)胞的過(guò)程中，為了吸引農(nóng)桿菌移向水稻受體細(xì)胞，需添加_________物質(zhì)。

（4）選用大腸桿菌作為受體細(xì)胞的優(yōu)點(diǎn)有____________（答出兩點(diǎn)即可）。但相比于水稻胚乳細(xì)胞，利用大腸桿菌獲得的rHSA也有一些缺點(diǎn)，請(qǐng)從生物膜系統(tǒng)的角度進(jìn)行分析_____________________。

（5）利用上述方法獲得的rHSA不能直接用于臨床醫(yī)療，你推測(cè)的原因是_____________。

Answer 1

【答案】反轉(zhuǎn)錄 引物 兩種引物通過(guò)互補(bǔ)配對(duì)與兩條單鏈DNA結(jié)合 啟動(dòng)子具有（物種及組織）特異性 酚類(lèi) 繁殖快；單細(xì)胞；遺傳物質(zhì)少 大腸桿菌沒(méi)有生物膜系統(tǒng)（或內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體），不能對(duì)rHSA進(jìn)行深加工 rHSA可能沒(méi)有生物活性或功能性較差或rHSA可能有安全隱忠

【解析】

基因工程的操作步驟：目的基因的獲取；構(gòu)建基因表達(dá)載體（含目的基因、啟動(dòng)子、終止子、復(fù)制原點(diǎn)和標(biāo)記基因）；把目的基因?qū)�入受體細(xì)胞（顯微注射法、農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、鈣離子處理法）；目的基因的檢測(cè)和鑒定（分子水平、個(gè)體水平檢測(cè)）。

（1）獲取HSA基因，提取人血細(xì)胞中的mRNA，在逆轉(zhuǎn)錄酶的催化下利用反轉(zhuǎn)錄法合成cDNA，再利用 PCR技術(shù)進(jìn)行快速擴(kuò)增，PCR過(guò)程中，需要一段已知目的基因的核苷酸序列合成引物，溫度降低到55℃的目的是兩種引物通過(guò)互補(bǔ)配對(duì)與兩條單鏈DNA結(jié)合。

（2）由于啟動(dòng)子具有物種或組織特異性，構(gòu)建在水稻胚乳細(xì)胞內(nèi)特異表達(dá)rHSA的載體時(shí)，需要選擇水稻胚乳細(xì)胞啟動(dòng)子。

（3）酚類(lèi)物質(zhì)會(huì)吸引農(nóng)桿菌移向水稻受體細(xì)胞，在利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化水稻受體細(xì)胞的過(guò)程中，故需添加酚類(lèi)物質(zhì)。

（4）大腸桿菌受體細(xì)胞的優(yōu)點(diǎn)有繁殖快；單細(xì)胞。但相比于水稻胚乳細(xì)胞，大腸桿菌沒(méi)有生物膜系統(tǒng)（或內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體），不能對(duì)rHSA進(jìn)行深加工。

（5）利用上述方法獲得的rHSA可能沒(méi)有活性，不能直接用于臨床醫(yī)療。