Question

【題目】研究發(fā)現(xiàn)，斑馬魚(yú)的HuC基因在早期胚胎神經(jīng)細(xì)胞中選擇性表達(dá)，為了研究該基因轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)上游的部分序列對(duì)該基因表達(dá)的影響，科研人員做了如下實(shí)驗(yàn)．
（1）為確定HuC基因的轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)，提取斑馬魚(yú)早期胚胎神經(jīng)細(xì)胞的總RNA，以與互補(bǔ)的一段單鏈DNA序列作為義務(wù)引物，加入酶，獲得cDNA．對(duì)該cDNA的序列進(jìn)行測(cè)定，與HuC基因的序列比對(duì)，確定轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)，定為+1號(hào)堿基，其上游的堿基定為負(fù)值．
（2）為了探究轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)上游不同長(zhǎng)度片段在基因轉(zhuǎn)錄中的作用，科研人員從（選填“基因組”或“cDNA”）文庫(kù)中獲取該轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)上游的片段，用酶處理此片段和含GFP（綠色熒光蛋白）基因的載體，獲得重組DNA分子．
（3）用不同種類的限制酶重復(fù)步驟（2），獲得不同長(zhǎng)度的重組DNA分子，通過(guò)顯微注射方法分別導(dǎo)入斑馬魚(yú)的細(xì)胞，通過(guò)熒光顯微觀察早期胚胎神經(jīng)細(xì)胞肌肉細(xì)胞中的熒光強(qiáng)度，結(jié)果如圖所示．

①獲得圖中所示的重組DNA分子，需要用到的限制酶沒(méi)有種．
②據(jù)圖分析，缺失HuC基因上游的片段就會(huì)造成HuC基因在所有細(xì)胞中表達(dá)被完全抑制．﹣1962bp至﹣432bp片段的存在會(huì)HuC基因在肌肉細(xì)胞中的表達(dá)，對(duì)神經(jīng)細(xì)胞中的表達(dá) ．

Answer 1

【答案】
（1）HuCmRNA；逆轉(zhuǎn)錄
（2）基因組；限制酶和DNA連接
（3）受精卵；7；﹣251bp至﹣1bp；部分抑制；無(wú)顯著影響
【解析】解：（1）由題意知，研究HuC基因的轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)的方法是通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄形成cDNA，然后與HuC基因的序列比對(duì)進(jìn)行確定，因此選擇逆轉(zhuǎn)錄的模板應(yīng)該是HuC基因轉(zhuǎn)錄形成的mRNA，引物為與HuCmRNA互補(bǔ)的一段單鏈DNA序列，逆轉(zhuǎn)錄過(guò)程需要加入逆轉(zhuǎn)錄酶進(jìn)行催化．（2）探究轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)上游不同長(zhǎng)度片段在基因轉(zhuǎn)錄中的作用，應(yīng)從基因組文庫(kù)中進(jìn)行選擇該轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)上游的不同長(zhǎng)度的片段；基因重組技術(shù)所用到的酶是限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶．（3）重組DNA分子導(dǎo)入動(dòng)物細(xì)胞常用的方法是顯微注射法，常用的受體細(xì)胞是受精卵．①DNA重組過(guò)程中需要用限制性內(nèi)切酶切割DNA分子和目的基因，由題圖可知，獲取﹣1162bp～﹣1bp與獲取﹣2771bp～﹣1163bp的酶相同、獲取﹣431～﹣1bp與﹣2771bp～﹣432bp酶相同，﹣251bp～﹣2771bp～﹣252bp酶相同，因此得圖中所示的重組DNA分子，需要用到的限制酶有7種．②由題圖可知，缺失HuC基因上游的﹣251bp至﹣1bp片段，神經(jīng)細(xì)胞和肌肉細(xì)胞都沒(méi)有綠色熒光，因此說(shuō)明缺失HuC基因上游的﹣251bp至﹣1bp片段就會(huì)造成HuC基因在所有細(xì)胞中表達(dá)被完全抑制．﹣1962bp至﹣432bp片段的存在會(huì)部分抑制HuC基因在肌肉細(xì)胞中的表達(dá)，對(duì)神經(jīng)細(xì)胞中的表達(dá)無(wú)顯著影響．
所以答案是：（1）HuCmRNA 逆轉(zhuǎn)錄（2）基因組 限制酶和DNA連接（3）受精卵 7 ②﹣251bp至﹣1bp 部分抑制 無(wú)顯著影響