Question

【題目】回答下列（一）、（二）小題

（一）人工瘤胃模仿了牛羊等反芻動物的胃，可用來發酵處理秸稈，提高秸稈的營養價值。為了增強發酵效果，研究人員從牛胃中篩選纖維素酶高產菌株，并對其降解纖維素能力進行了研究

（1）在樣品稀釋和涂布平板步驟中，下列選項不需要的是_________（填序號）

①酒精燈 ②培養皿 ③顯微鏡 ④無菌水

（2）在涂布平板時，滴加到培養基表面的菌懸液量不宜過多的原因是______________________。

（3）向試管內分裝含瓊脂的培養基時，若試管口粘附有培養基，需要用酒精棉球擦凈的原因是____________________。

（4）剛果紅可以與纖維素形成紅色復合物，但并不與纖維素降解產物纖維二糖和葡萄糖發生這種反應。研究人員在剛果紅培養基平板上，篩到了幾株有透明降解圈的菌落（見圖）。圖中降解圈大小與纖維素酶的_____________有關。圖中降解纖維素能力最強的菌株是_________（填圖中序號）

（5）分離得到的纖維素酶高產菌 株若進行擴大培養需在_________條件下，用_________ (工具)完成接種。

（二）請回答關于葡萄酒生產和檢測方面的問題

（1）各大酒莊釀制葡萄酒時，為保持各產區葡萄酒的特有口感，發酵菌種主要來自附在葡萄皮上的_________。該菌種在學生實驗中也被頻繁使用。實驗室在保存該菌種時，通常將該菌種接種到_________培養基上，再放入冰箱中冷藏。

（2）某實驗小組釀制的葡萄酒有一股酸味，從發酵條件分析，可能原因是_________導致醋桿菌大量生長產生醋酸，其反應式為__________________。

（3）該實驗小組為研究過濾、沉淀后葡萄酒中的活菌數，檢測流程如下所示。

取樣→稀釋→接種→培養→計數→統計→報告

①檢測過程中，應將不同稀釋度的樣液用_________法分別接種于若干組平面培養基上，培養24～48小時出現_________后計數。

②下列關于檢測流程的敘述中，正確的是_________

A．配制培養基時應在調節酸堿度以前滅菌

B．為防止外來微生物污染，應將培養皿倒置在超凈臺上培養

C．根據培養結果，只需統計適宜稀釋度樣液組的菌落數

D．理論上，統計分析結果會略高于實際活菌數

Answer 1

【答案】③ 培養基表面的菌懸液會出現積液，導致菌體堆積，影響分離效果 避免培養基污染棉塞 量與活性 ① 無菌 接種環 （野生）酵母菌 斜面 有氧條件∕有氧環境 略 涂布（ 分離） （單）菌落 C

【解析】

微生物培養的關鍵是無菌操作．微生物培養過程中除考慮營養條件外，還要考慮pH、溫度和滲透壓等條件，需對培養基和培養皿進行消毒．可以通過稀釋涂布平板法或顯微鏡計數法進行統計計數。

剛果紅可以與纖維素形成紅色復合物，當纖維素被纖維素酶分解后，紅色復合物無法形成，出現以纖維素分解菌為中心的透明圈，我們可以通過是否產生透明圈來篩選纖維素分解菌。剛果紅可以在細菌菌落形成前倒平板時加入，也可以在菌落形成后加入，若在細菌菌落形成前倒平板時加入剛果紅，則所加剛果紅要進行滅菌，以防雜菌的侵入，影響纖維素分解菌菌落的形成；若在菌落形成后加入剛果紅，則不需要滅菌。

（一）

（1）在樣品稀釋和涂布平板步驟中，需要使用酒精燈對接種環進行滅菌，對培養皿進行滅菌，用無菌水稀釋菌液，故選③。

（2）在涂布平板時，滴加到培養基表面的菌懸液量過多會在培養基表面出現積液，導致菌體堆積，影響分離效果，所以不能過多。

（3）分裝含瓊脂的培養基時，若試管口粘附有培養基，需要用酒精棉球擦凈以防雜菌污染，避免培養基污染棉塞。

（4）在剛果紅培養基平板上，篩到了幾株有透明降解圈的菌落，降解圈大小與纖維素酶的多少和活性有關；纖維素酶的量越多，活性越強，分解的纖維素越多，透明降解圈越大，所以圖中降解纖維素能力最強的菌株是①。

（5）分離得到的纖維素酶高產菌株，在固體培養基上，故進行擴大培養需在無菌條件下，用接種環 (工具)完成接種。

（二）

（1）為保持各產區葡萄酒的特有口感，可利用附在葡萄皮上的(野生)酵母菌作為菌種進行發酵；要保存菌種，可先將要保存的菌種接種到試管的固體斜面培養基上，在合適的溫度下配以，當菌落長成后，將試管放入4℃的冰箱中冷藏保存。

（2）某實驗小組釀制的葡萄酒有一股酸味，從發酵條件分析，可能原因是有氧條件導致醋酸菌大量生長產生醋酸。其反應式為C6H12O62C2H5OH + 2CO2 + 少量能量。

（3）①常用稀釋涂布平板法來統計樣品中活菌的數目。在檢測過程中，應將不同稀釋度的樣液用涂布分離法分別接種于若干組平面培養基上，培養24-48小時出現(單)菌落后計數。

②培養基的pH值(酸堿度)直接影響培養物對離子的吸收，配制培養基時應在調節酸堿度以后滅菌，A項錯誤；倒置培養，一方面可防止凝結在皿蓋上的水蒸流到培養基表面導致染菌，另一方面有利于菌種利用培養基營養，加快生長速度。但不是將培養皿直接倒置在超凈臺上，而是培養皿的蓋子朝下,帶培養基的底朝上，B項錯誤；當樣品的稀釋度足夠高時，培養基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌，通過統計平板上的菌落數，就能推測出樣品中大約有多少個活菌，因此，可根據培養結果，只需統計適宜稀釋度樣液組的菌落數即可，C項正確；當兩個或多個細菌連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落，因此理論上，統計分析結果會比實際活菌數目低，D項錯誤；故選C。