Question

【題目】肺細胞中的let-7基因表達減弱，癌基因RAS表達增強，會引發肺癌。研究人員利用基因工程技術將let-7基因導入肺癌細胞實現表達，發現肺癌細胞的增殖受到抑制。該基因工程技術基本流程如圖1。請回答：

（1）進行過程①時，需用相關酶切開載體以插入let-7基因，該酶破壞的化學鍵是___________。重組載體應有RNA聚合酶識別和結合的部位，該部位稱為___________，同時，重組載體還應有___________以驅動自身復制以及___________以鑒別受體細胞是否含有目的基因。

（2）進行過程②時，當細胞生長到表面___________時，需用___________酶處理貼附在培養皿壁上的細胞并進行________________后繼續培養。

（3）研究發現，let-7基因影響癌基因RAS表達的機理如圖2所示。據圖分析，肺癌細胞增殖受到抑制，可能是由于細胞中_________含量減少引起的，作出該假設的依據是_________________________。

Answer 1

【答案】 磷酸二酯鍵 啟動子 復制原點 標記基因 相互接觸 胰蛋白（膠原蛋白） 分瓶 RAS蛋白 miRNA和RASmRNA互補配對，抑制了翻譯過程;據圖分析可知，RASmRNA和沒有翻譯功能的miRNA結合后能抑制RAS基因的翻譯，所以細胞中RAS蛋白質的含量減少

【解析】試題分析：分析圖1：圖1表示利用基因工程技術將let一7基因導入肺癌細胞的流程，其中①表示基因表達載體的構建過程；②表示用胰蛋白酶處理組織細胞，使之成為單個細胞，再加細胞懸液進行細胞培養的過程；分析圖2：圖2表示let-7基因影響癌基因RAS的表達的原理，let-7基因轉錄產物miRNA與RAS基因轉錄產物RAS mRNA結合，使RAS基因翻譯受到抑制，引起細胞中的RAS蛋白含量減少，進而導致癌細胞增殖受到抑制。

（1）過程①表示基因表達載體的構建，在該過程中需要用限制性核酸內切酶（簡稱限制酶）對載體進行切割，以便于目的基因的插入，該酶切割的是DNA分子中的磷酸二脂鍵。重組質粒上的啟動子是RNA聚合酶識別和結合的部位，復制原點可以啟動質粒的自我復制，標記基因可以鑒別受體細胞是否含有目的基因。

（2）過程②表示用胰蛋白酶處理組織細胞獲得單個細胞的過程，當細胞生長到表面相互接觸時，需用胰蛋白酶或者膠原蛋白酶處理貼附在培養皿壁上的細胞并進行分瓶后繼續培養。

（3）據圖2可知，let-7基因影響RAS基因表達的機理是：let-7基因轉錄產物miRNA與RAS基因轉錄產物RAS mRNA結合，使RAS基因翻譯受到抑制，引起細胞中的RAS蛋白含量減少，進而導致癌細胞增殖受到抑制。