Question

【題目】突尼斯軟籽石榴是一種熱門水果，深受大家喜愛，但其抗寒能力差，這成為限制該種石榴栽培的重要因素�？茖W家們利用基因工程對其進行定向改造，以得到抗寒性強的優良品種。下圖表示構建基因表達載體的方法，圖中標注的是限制酶的酶切位點，請回答下列問題：

（1）在切割目的基因時選擇的兩種限制酶最好為____________________，選擇兩種限制酶的優勢是可避免________________。

（2）可通過________技術對獲得的抗寒基因進行體外擴增，該過程使DNA解旋的方法與細胞內復制時的差異是________________，體外擴增時使用的酶具有的顯著特點是__________________。

（3）將重組質粒導入經________（過程）培養成的軟籽石榴的愈傷組織中常用________法。

Answer 1

【答案】SmaI和PstI 質粒自身成環和質粒與目的基因的反向連接 PCR 體外擴增目的基因利用加熱至90~95℃的高溫使DNA解旋，細胞內復制目的基因使用解旋酶使DNA解旋 耐高溫（或具有熱穩定性） 脫分化 農桿菌轉化

【解析】

分析題圖可知：HindIII的切割位點會破壞質粒的標記基因，AluI會破壞目的基因，故不能用上述兩種酶切割。

（1）根據圖中各種限制酶的切割位點，既可以獲得目的基因又不能破壞質粒上的標記基因，故選用SmaI和PstI；選擇兩種酶的優勢是可避免含有目的基因的外源DNA自身環化，可以防止質粒自身環化，也可避免質粒與目的基因的反向連接。

（2）對獲得的抗寒基因進行體外擴增，可用PCR技術；在細胞內DNA復制需要解旋酶將雙鏈解開，而PCR技術利用加熱至90~95℃的高溫使DNA解旋；該技術使用的DNA聚合酶具有耐高溫的特性。

（3）軟籽石榴的愈傷組織經過植物組織培養得過程中的脫分化環節得到；將重組質粒導入受體細胞常用農桿菌轉化法。