Question

【題目】如圖甲、乙中的箭頭表示三種限制酶的酶切位點，ampR表示氨芐青霉素抗性基因，neoR表示新霉素抗性基因。下列敘述正確的是

A. 圖甲中的質粒用BamHⅠ切割后，含有4個游離的磷酸基團

B. 在構建重組質粒時，可用PstⅠ和BamHⅠ切割質粒和外源DNA

C. 同時用PstⅠ和HindⅢ酶切，加入DNA連接酶后可得到兩種重組質粒

D. 導入目的基因的大腸桿菌可在含氨芐青霉素的培養基中生長

Answer 1

【答案】C

【解析】

分析題圖：質粒和外源DNA分子都含有三種限制酶切點，即限制酶BamHⅠ、PstⅠ和Hind III，其中BamHⅠ切割位點在目的基因上，所以不能用該酶切割外源DNA了。用PstⅠ和Hind III酶切質粒切成兩個片段，用PstⅠ和Hind III酶能將外源DNA切成三段，只有含目的基因的片段通過DNA連接酶與質粒連接形成的重組質粒符合要求，而另一個重組質粒無目的基因，不符合要求，導入目的基因的大腸桿菌，其重組質粒是用PstⅠ和Hind III酶切割的，其中的Ampr（氨芐青霉素抗性基因）已被破壞，不能抗氨芐青霉素。

質粒用BamHⅠ切割后將產生一個切口，打開了2個磷酸二酯鍵，產生2個游離的磷酸基團，故A錯誤；由于目的基因中含有一個BamHⅠ的識別位點，若用BamHⅠ切割將破壞目的基因的結構，故B錯誤；目的基因兩側分別有PstⅠ和HindⅢ的識別位點，且質粒也含有二者的識別位點，同時用這兩種酶切割時，目的基因與質粒之間有一種符合要求的連接方式和一種不符合要求的連接方式，故C正確；PstⅠ的識別位點位于氨芐青霉素抗性基因中，用PstⅠ切割后，導致該抗性基因被破壞，從而造成導入目的基因的大腸桿菌不具有抗氨芐青霉素的特性，故D錯誤，故選C。