Question

【題目】金屬硫蛋白（MT）是一類廣泛存在的金屬結合蛋白，某研究小組計劃通過PCR技術擴增獲得目的基因，構建轉基因工程菌，用于重金屬廢水的凈化處理。PCR擴增過程示意圖如下，引物1和引物2分別與MT基因兩端的序列互補。下列表述正確的是（ ）

A.引物1和引物2的序列相同，且序列已知

B.步驟1需要解旋酶，步驟2需要耐高溫的DNA聚合酶，步驟3需要DNA連接酶

C.第三輪循環后，可擴增出2個所需要的目的基因分子

D.為方便構建重組質粒，可在引物中設計適當的限制性核酸內切酶位點

Answer 1

【答案】CD

【解析】

PCR技術：

1、概念：PCR全稱為聚合酶鏈式反應，是一項在生物體外復制特定DNA的核酸合成技術。

2、原理：DNA復制。

3、前提條件：要有一段已知目的基因的核苷酸序以便合成一對引物。

4、條件：模板DNA、四種脫氧核苷酸、一對引物、熱穩定DNA聚合酶（Taq酶）。

5、過程：①高溫變性：DNA解旋過程；②低溫復性：引物結合到互補鏈DNA上；③中溫延伸：合成子鏈．PCR擴增中雙鏈DNA解開不需要解旋酶，高溫條件下氫鍵可自動解開。

A、引物1和引物2的序列互補配對，A錯誤；

B、步驟1高溫變性，不需要解旋酶，B錯誤；

C、第一輪循環后沒有得到目的基因，第二輪循環后得到兩條目的基因的模板鏈，第三輪循環后便可得到2個目的基因，C正確；

D、構建重組質粒，首先要用限制酶切割含目的基因的DNA片段和質粒，所以位于目的基因兩端的引物中需要增加適當的限制性核酸內切酶位點，D正確。

故選CD。