Question

【題目】為了培育新品種,研究者從其他植物中獲取基因C(圖1),擬將其與質(zhì)粒(圖2)重組,再去轉(zhuǎn)化棉花細(xì)胞和小鼠細(xì)胞。回答下列問題：

（1）構(gòu)建含C基因的表達(dá)載體時(shí),需選擇圖2中的____________限制酶切割質(zhì)粒。構(gòu)建基因表達(dá)載體的目的是__________________________________________。

（2）在_______________條件下，將被C基因轉(zhuǎn)化的棉花細(xì)胞培養(yǎng)在人工配制的培養(yǎng)基上，給予適宜的條件，誘導(dǎo)其產(chǎn)生愈傷組織、叢芽，最終形成完整的植株。人工配制的培養(yǎng)基中必須有一定的營養(yǎng)和激素，實(shí)驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn)部分接種在無激素培養(yǎng)基上的芽也能長根,其原因是__________________________________________。

（3）若將被C基因轉(zhuǎn)化的小鼠細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，在傳代培養(yǎng)時(shí)常用______________分散細(xì)胞，該過程中不能用胃蛋白酶代替，原因是________________________________。

Answer 1

【答案】EcoRⅠ 使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，并且可以遺傳給下一代，同時(shí)，使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用 無菌和人工控制 芽頂端合成的生長素向基部運(yùn)輸,促進(jìn)根的分化 胰蛋白質(zhì)酶 細(xì)胞培養(yǎng)的適宜pH為7.2-7.4，胃蛋白酶作用的適宜pH約為2，當(dāng)pH大于6時(shí)，胃蛋白酶就會(huì)失去活性，所以用胃蛋白酶不行

【解析】

基因工程的操作步驟：獲取目的基因（基因文庫、PCR、人工合成）；構(gòu)建基因表達(dá)載體（含標(biāo)記基因、啟動(dòng)子、終止子、目的基因、復(fù)制原點(diǎn)等）；把目的基因?qū)�入受體細(xì)胞（顯微注射法、農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法、花粉管通道法、鈣離子處理法）；目的基因的檢測(cè)和鑒定（分子水平和個(gè)體水平檢測(cè)，前者包括DNA分子雜交、分子雜交和抗原抗體雜交；后者如抗蟲抗病接種實(shí)驗(yàn)）。

（1）根據(jù)目的基因的兩端存在EcoRⅠ酶切位點(diǎn)可知，應(yīng)該選擇EcoRⅠ對(duì)質(zhì)粒和目的基因進(jìn)行切割，進(jìn)而構(gòu)建基因表達(dá)載體。構(gòu)建基因表達(dá)載體可以使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，并且可以遺傳給下一代，同時(shí)，使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用。

（2）要被C基因轉(zhuǎn)化的棉花細(xì)胞培養(yǎng)成完整植株，需要經(jīng)過植物組織培養(yǎng)，該過程需要在離體、無菌、人工控制的條件下進(jìn)行。芽頂端合成的生長素向基部運(yùn)輸，促進(jìn)根的分化，故部分接種在無激素培養(yǎng)基上的芽也能長根。

（3）可以用胰蛋白酶或膠原蛋白酶對(duì)動(dòng)物細(xì)胞進(jìn)行分散培養(yǎng)，由于細(xì)胞培養(yǎng)的適宜pH為7.2-7.4，胃蛋白酶作用的適宜pH約為2，當(dāng)pH大于6時(shí)，胃蛋白酶就會(huì)失去活性，所以不能用胃蛋白酶分散細(xì)胞。