Question

【題目】乙醇等"綠色能源"的開發備受世界關注。利用玉米秸稈生產燃料酒精的大致流程為：

（1）玉米秸稈預處理后，因該選用____酶和____酶形成纖維二糖，再使用___________酶使之轉化為發酵所需的葡萄糖。

（2）從以下哪些微生物中可以提取上述酶？________（多選）

A．釀制果醋的醋酸菌B．生長在腐木上的霉菌C．制作酸奶的乳酸菌D．反芻動物瘤胃中生存的某些微生物

（3）若從土壤中分離產生這種酶的微生物，所需要的培養基為______（按功能分），培養基中的碳源為__________。微生物在純化培養時常用方法是________和_________。

（4）在生產糖液的過程中，為了使酶能夠反復利用，可采用___________技術。

（5）為測定培養液中某細菌數量，某小組同學抽取1mL培養液經10倍的梯度稀釋后進行接種培養，每個培養基上接種量為0.1mL，隨后對每個培養基中出現的菌落進行計數（結果如下）。培養液中菌體數目約為__________________個/mL

稀釋次數	4			5			6
培養基編號	1	2	3	1	2	3	1	2	3
菌落數目	263	321	345	38	4	40	6	2	8

Answer 1

【答案】C1CX葡萄糖苷酶B D選擇培養基纖維素平板劃線法稀釋涂布平板法固定化酶（固定化細胞）3.9×107

【解析】

1、用植物秸稈生產酒精是利用微生物進行發酵的過程。植物秸稈中的有機物主要是纖維素，纖維素分解菌產生的纖維素酶能將其水解成葡萄糖。從土壤中分離纖維素分解菌的一般步驟是：土壤取樣、選擇培養、梯度稀釋、涂布培養和篩選菌株。篩選纖維素分解菌必須使用以纖維素為唯一碳源的選擇培養基，并且需要做產纖維素酶發酵葡萄糖的實驗進行酶活性的檢測。2、常用的接種方法有平板劃線法和稀釋涂布平板法，平板劃線分離法的過程是：由接種環以菌操作沾取少許待分離的材料，在無菌平板表面進行平行劃線、扇形劃線或其他形式的連續劃線，微生物細胞數量將隨著劃線次數的增加而減少，并逐步分散開來，如果劃線適宜的話，微生物能一一分散，經培養后，可在平板表面得到單菌落。

（1）玉米秸稈預處理后，因該選用C1酶和CX酶形成纖維二糖，再使用葡萄糖苷酶使之轉化為發酵所需的葡萄糖。

（2）由于纖維素分解酶存在于分解纖維素的微生物中，故應從富含纖維素的環境中去尋找纖維素分解菌，則應從生長在腐木上的霉菌和反芻動物瘤胃中生存的某些微生物中提取。故選：BD。

（3）若從土壤中分離產生這種酶的微生物，所需要的培養基按功能分為選擇培養基，培養基中的碳源為纖維素。微生物在純化培養時常用方法是平板劃線法和稀釋涂布平板法。

（4）在生產糖液的過程中，為了使酶能夠反復利用，可采用固定化酶（固定化細胞）技術。

（5）統計菌落數目時，應該統計平板中菌落數目在30—300的，而第4次稀釋后統計到的數目只有一個平板小于大于30小于300，第6次稀釋后各平板統計的數目均小于30，這兩次稀釋后統計的數目誤差較大，統計時應除去這兩組數據。第5次稀釋后統計的菌落數目有一個平板小于30，因此第5次稀釋后兩個平板上菌落的平均值為（38+40）/2=39個，因此培養液中菌體數目約為39/0.1×105=3.9×107個。