Question

【題目】煙草葉片感染煙草花葉病毒（TMV）后既影響產量也影響品質，沙棘果中含有的苦木素對TMV病毒具有抑制作用，現將沙棘中與苦木素合成有關的基因導入煙草，獲得抗TMV的煙草，培育過程如下圖。請回答有關問題：

（1）若①過程是由mRNA通過逆轉錄得到的目的基因，則目的基因中不含有_________________（答兩項），②過程構建的Ti質粒除了含有目的基因，還必須有標記基因、_________。標記基因是__________，其功能是___________________。

（2）③過程將重組Ti質粒導入煙草體細胞的常用方法是____________。Ti質粒上的T-DNA可使目的基因進入受體細胞，并將其_____________。

（3）過程⑤可采取_____________的方法，檢測植株是否合成與苦木素合成相關的蛋白質；在個體水平的鑒定過程中，可通過______________的方法來確定植株是否具有抗性。

Answer 1

【答案】啟動子、內含子 啟動子、終止子 卡那霉素基因 鑒定和篩選導入目的基因成功的受體細胞 農桿菌轉化法 插入植物的染色體上 抗原——抗體雜交 接種TMV病毒

【解析】

1、基因工程技術的基本步驟：

（1）目的基因的獲取：方法有從基因文庫中獲取、利用PCR技術擴增和人工合成；

（2）基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等；

（3）將目的基因導入受體細胞：根據受體細胞不同，導入的方法也不一樣．將目的基因導入植物細胞的方法有農桿菌轉化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因導入微生物細胞的方法是感受態細胞法；

（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA--分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質--抗原-抗體雜交技術。個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

（1）利用逆轉錄法得到的目的基因不含有啟動子和內含子，構建重組Ti質粒，除了含有目的基因外，還必須含有啟動子、終止子和標記基因，該培育過程中的標記基因為卡那霉素基因，用于鑒定和篩選導入目的基因成功的受體細胞。

（2）通常采用農桿菌轉化法將重組質粒導入受體細胞，Ti質粒上的T-DNA可使目的基因進入受體細胞，并將其插入植物的染色體上。

（3）可采用抗原抗體雜交法檢測與苦木素合成相關的基因是否表達，通過接種TMV病毒進行個體水平上的檢測，檢測煙草有無對TMV的抗性。