Question

【題目】楊樹(shù)是重要的經(jīng)濟(jì)樹(shù)種，但其害蟲(chóng)很多，利用基因工程培育抗蟲(chóng)楊樹(shù)是害蟲(chóng)防治的有效手段。胰蛋白酶抑制劑能干擾昆蟲(chóng)的代謝，引起昆蟲(chóng)死亡，但對(duì)人體無(wú)害�？茖W(xué)家將馬鈴薯胰蛋白酶抑制劑基因（Pin-Ⅱ）通過(guò)農(nóng)桿菌導(dǎo)入楊樹(shù)細(xì)胞，培育成了抗蟲(chóng)楊樹(shù)。圖1表示含目的基因的DNA分子片段，圖2表示質(zhì)粒，其中Apr表示氨芐青霉素抗性基因，Ner表示新霉素抗性基因，復(fù)制原點(diǎn)是質(zhì)粒DNA復(fù)制的起點(diǎn)，使其能在受體細(xì)胞中存在和遺傳。箭頭表示識(shí)別序列完全不同的4種限制酶的酶切位點(diǎn)。

（1）利用農(nóng)桿菌中的Ti質(zhì)粒上的T-DNA，就可以使目的基因插入到楊樹(shù)細(xì)胞的__________上，使目的基因的遺傳特性得以維持穩(wěn)定和表達(dá)。

（2）為使目的基因與質(zhì)粒高效重組，最好選用__________（限制酶）作用于含目的基因的DNA和質(zhì)粒，然后在________酶的作用下形成重組質(zhì)粒。

（3）成功導(dǎo)入重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌在分別含有氨芐青霉素和新霉素的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)狀況是_________。

（4）用轉(zhuǎn)基因楊樹(shù)葉片喂養(yǎng)某種楊樹(shù)害蟲(chóng)，發(fā)現(xiàn)害蟲(chóng)死亡率顯著增加。試從分子水平寫(xiě)出轉(zhuǎn)基因楊樹(shù)和非轉(zhuǎn)基因楊樹(shù)的葉片細(xì)胞的不同點(diǎn)________________（至少答出兩條）。

Answer 1

【答案】染色體DNA EcoRI和PstI DNA連接酶 前者不可以生長(zhǎng)，后者可以生長(zhǎng) 比較轉(zhuǎn)基因和非轉(zhuǎn)基因兩種楊樹(shù)的葉片細(xì)胞，轉(zhuǎn)基因楊樹(shù)細(xì)胞中含有胰蛋白酶抑制劑基因、胰蛋白酶抑制劑的mRNA、胰蛋白酶抑制劑

【解析】

基因工程技術(shù)的基本步驟：
（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫(kù)中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成。
（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等。
（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣。將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法。
（4）目的基因的檢測(cè)與鑒定：分子水平上的檢測(cè)：①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)。個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲(chóng)鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

（1）利用農(nóng)桿菌中的Ti質(zhì)粒上的T-DNA，就可以使目的基因插入到楊樹(shù)細(xì)胞的染色體DNA上，使目的基因的遺傳特性得以維持穩(wěn)定和表達(dá)。

（2）為使目的基因與質(zhì)粒高效重組，最好選用EcoR I和Pst I作用于含目的基因的DNA和質(zhì)粒，然后在DNA連接酶的作用下形成重組質(zhì)粒。
（3）重組質(zhì)粒構(gòu)建過(guò)程中用EcoR I和Pst I進(jìn)行切割，Pst I會(huì)破壞氨芐青霉素抗性基因，所以質(zhì)粒上保留完整的標(biāo)記基因是新霉素抗性基因，所以成功導(dǎo)入重組質(zhì)粒的細(xì)胞會(huì)表現(xiàn)為不抗氨芐青霉素，抗新霉素，故成功導(dǎo)入重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌在含有氨芐青霉素培養(yǎng)基上不能生長(zhǎng)，在含新霉素培養(yǎng)基上可以生長(zhǎng)。

（4）用轉(zhuǎn)基因楊樹(shù)葉片喂養(yǎng)某種楊樹(shù)害蟲(chóng)，發(fā)現(xiàn)害蟲(chóng)死亡率顯著增加。從分子水平比較轉(zhuǎn)基因和非基因楊樹(shù)的葉片細(xì)胞的三個(gè)不同點(diǎn)是比較轉(zhuǎn)基因和非基因兩種楊樹(shù)的葉片細(xì)胞，轉(zhuǎn)基因楊樹(shù)細(xì)胞中含有胰蛋白酶抑制劑基因、胰蛋白酶抑制劑的mRNA、胰蛋白酶抑制劑。