Question

【題目】某研究小組為了研究蚯蚓體表分泌液中含有的多種抗菌肽類對土壤微生物是否具有抑制作用，進行了相應實驗。請回答下列問題：

（1）稱量牛肉膏、蛋白胨、NaCl、水和___________制作固體培養基，并用___________法滅菌后，倒平板，獲得固體培養基。

（2）獲得土壤瀝出液后，利用___________法將瀝出液均勻地接種在培養基上。

（3）利用平板打孔法將蚯蚓體表分泌液注入平板上分散的孔中，在適宜的條件下培養一段時間后，結果如下圖所示。實驗結果是___________，實驗結論是______________________。

（4）將土壤瀝出液接種到以纖維素為唯一碳源的含有蚯蚓體表分泌液的培養基上，培養后用剛果紅染色。結果發現絕大部分菌落周圍出現不變紅的透明圈，這說明______________________。

（5）科學家使用___________法分離分泌液中不同分子量的抗菌肽類，最先分離出來的是___________的肽類。

Answer 1

【答案】瓊脂 高壓蒸汽滅菌 稀釋涂布平板 平板上注入了蚯蚓體表分泌液的孔周圍沒有菌落 蚯蚓體表分泌液對土壤微生物具有抑制作用 蚯蚓體表分泌液對土壤中的纖維素分解菌無抑制作用 凝膠色譜 分子量大

【解析】

1.微生物常見的接種的方法：

①平板劃線法：將已經熔化的培養基倒入培養皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養．在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數逐漸減少，最后可能形成單個菌落。

②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經過大量稀釋后，均勻涂布在培養皿表面，經培養后可形成單個菌落。

2. 凝膠色譜法原理：凝膠色譜法是根據相對分子質量的大小來分離蛋白質的有效方法，相對分子質量小的蛋白質容易進入凝膠內部的通道，路程長，移動的速度慢，相對分子質量大的蛋白質不容易進入凝膠內部的通道，路程短，移動的速度快，因此相對分子質量不同的蛋白質得以分離。

3.要驗證蚯蚓體表分泌液對土壤微生物具有抑制作用，說明蚯蚓體表分泌液對土壤微生物具有抑制作用是實驗的結論，對于實驗設計應遵循對照原則和單一變量原則，且解答時應緊扣實驗目的及題干要求，控制好無關變量。

（1）制作固體培養基時需要加入瓊脂作為凝固劑，培養基需要使用高壓蒸汽滅菌法滅菌。

（2）根據以上分析可知，微生物的常用的接種方法有稀釋涂布平板法和平板劃線法，對于液體菌種的接種方法是稀釋涂布平板法，故土壤浸出液需要使用稀釋涂布平板法進行接種。

（3）根據題意可知，如果平板上注入了蚯蚓體表分泌液的孔周圍沒有菌落，說明蚯蚓體表分泌液中含有多種抗菌肽類對土壤微生物有抑制作用。

（4）由于蚯蚓常以土壤中秸稈為食，依靠纖維素分解菌幫助分解纖維素，故在剛果紅培養基上大部分菌落周圍出現透明圈，也證明蚯蚓體表分泌液對土壤中纖維素分解菌無抑制作用。

（5）根據以上分析可知，分離蛋白質采用凝膠色譜法，因此分泌液中不同分子量的抗菌肽類需要使用凝膠色譜法分離，該方法中最先分離出來的是分子量大的肽類，最后分離出的是分子量小的肽類。