Question

【題目】（六）回答下列有關遺傳信息傳遞與表達的問題。

利用大腸桿菌作為工程菌生產人胰島素，圖甲中的三個DNA片段上以此表示出了EcoR I、BamH I和Sau3A I三種限制性內切酶的識別序列與切割位點，圖乙為某種表達載體示意圖（載體上的EcoR I、Sau3A I的切點是唯一的）。

【1】質粒載體作為基因工程的工具，應具備的基本條件有_______________________。

【2】可以從下列哪些人體細胞中獲取生產人胰島素的目的基因 （多選題）。

A. 消化道黏膜上皮細胞 B. 胰島A細胞

C. 胰島B細胞 D. 造血干細胞

【3】經BamH I酶切割得到的目的基因可以與圖乙所示質粒被_____________酶切后的產物連接，理由是_______________。連接后的重組質粒_____（能、不能、不一定）被BamH I切割。

【4】將重組質粒導入到大腸桿菌受體細胞，可用含有___________的培養基進行初步篩選。目的基因成功表達的標志是________________。

【5】已知圖乙所示質粒經EcoRI和Sau3AI聯合酶切后形成2.0 kb和4.2 kb（1 kb = 1000對堿基）兩種DNA片段，若將0.8 kb的單個基因插在質粒的Sau3AI位點處，所形成的重組質粒用EcoRI和Sau3AI聯合酶切后，能形成的DNA片段分別為 。

A. 2.8 2.0 2.2 B. 1.8 2.0 2.2

C. 4.0 1.8 1.0 D. 2.0 0.8 4.2

Answer 1

【答案】

【1】能自我復制、具有標記基因、能啟動外源目的基因的轉錄和翻譯、含有多個酶切位點

【2】ABCD

【3】Sau3AⅠ限制酶Sau3AⅠ與BamHⅠ切割后形成的黏性末端相同不一定

【4】四環素合成胰島素

【5】D

【解析】據圖分析，圖甲中三種限制酶的識別和切割位點不同，但是BamH I和Sau3A I漏出的粘性末端相同，可以用DNA連接酶連接；圖乙質粒上含有啟動子、終止子、復制原點、標記基因（四環素抗性基因）、EcoR I和Sau3A I兩種限制酶的切割位點。

【1】質粒作為運載體，應具備的基本條件有：能自我復制、具有標記基因、能啟動外源目的基因的轉錄和翻譯、含有多個酶切位點等。

【2】消化道黏膜上皮細胞、胰島A細胞、胰島B細胞、造血干細胞都是由受精卵增殖分化而來的，遺傳物質不變，都可以提取到人胰島素基因，故選ABCD。

【3】分析圖解可知，限制酶Sau3AI和BamHI酶切割后形成的黏性末端相同，因此經BamHI酶切割得到的目的基因可以與上述表達載體被Sau3AI酶切后的產物連接；BamHI酶識別的序列為GGATCC，Sau3AⅠ限制酶識別的序列為GATC，因此連接后的重組質粒不一定被BamHI切割。

【4】重組質粒中含有四環素抗性基因，將重組質粒導入到大腸桿菌受體細胞，可用含有四環素的培養基進行初步篩選。目的基因是胰島素基因，胰島素基因成功表達的標志是合成胰島素。

【5】若將0.8kb的單個基因插在質粒的Sau3AI位點處，所形成的重組質粒中含有2個Sau3AI切割位點和1個EcoRI切割位點，因此重組質粒用EcoRI和Sau3AI聯合酶切后，能形成的DNA片段分別為4.2kb、0.8kb、2kb。