Question

【題目】【生物—選修I:生物技術實踐】下圖是分離、純化及保存枯草芽抱桿菌菌株的過程示意圖:將土壤表層土稀釋液煮沸巧分鐘(枯草芽抱桿菌的芽抱不會失去活性)靜置5分鐘后獲得樣品，進行如下操作:

請回答下列問題:

(1)可知，除用選擇培養基外，還有__________起到篩選作用。

(2)上圖的劃線操作中，培養基從物質狀態分類上屬于_______，接種環用____法進行滅菌，劃線過程中第一區和最后一區的劃線_______________(能/不能)相連。

(3)用稀釋涂布平板法在5個培養基平板上，均接種稀釋倍數為104的樣品液0.1ml,培養一段時間后，平板長出來的菌落數分別為13. 160, 532, 175和187。每毫升樣品中的細菌數量為

_______________個。

(4)用上述方法統計出的菌落數往往比樣品中活菌的實際數目_____，原因是____。

Answer 1

【答案】 煮沸 固體培養基 灼燒滅菌（灼燒） 不能 1.74×107 少 兩個或者多個細胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落

【解析】試題分析：微生物的接種方法：平板劃線法和稀釋涂布法。
（1）平板劃線操作：
①挑取他含菌樣品：選用平整、圓滑的接種環，按無菌操作法挑取少量菌種。
②劃A區：將平板倒置于煤氣（酒精）燈旁,左手拿出皿底并盡量使平板垂直于桌面，有培養基一面向著煤氣燈（這時皿蓋朝上，仍留在煤氣燈旁)，右手拿接種環先在A區劃3—4條連續的平行線(線條多少應依挑菌量的多少面定）。劃完A區后應立即燒掉環上的殘菌，以免因菌過多而影響后面各區的分離效果。在燒接種環時，左手持皿底并將其覆蓋在皿蓋上方(不要放入皿蓋內)，以防止雜菌的污染。
③劃其他區：將燒去殘菌后的接種環在平板培養基邊緣冷卻一下，并使B區轉到上方，接種環通過A區（菌源區）將菌帶到B區，隨即劃數條致密的平行線。再從B區作C區的劃線。最后經C區作D區的劃線，D區的線條應與A區平行，但劃D區時切勿重新接觸A、B區，以免極該兩區中濃密的菌液帶到D區，影響單菌落的形成。隨即將皿底放入皿蓋中。燒去接種環上的殘菌。
④等平板凝固后，將平板倒置。
（2）稀釋涂布法：是將菌液進行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養基的表面，在適宜條件下培養。在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物將被分散成單個細胞，從而能在培養基表面形成單個的菌落。能夠測定樣品中活菌數的方法是：稀釋涂布平板法。

（1）枯草芽抱桿菌的芽抱耐高溫，所以煮沸可以殺滅枯草芽抱桿菌的芽抱以外的雜菌，起到選擇作用。

（2）平板劃線法用的是固體培養基，劃線前需要用灼燒的方法對接種環滅菌。劃線時要避免最后一區的劃線與第一區線連，因為最后一區是細菌最稀少的，而第一區是細菌最致密的，如果連在一起則有可能影響單個菌落的分離效果。

（3）根據題干信息，五個數值中13和532相差太大，不予計算，所以每毫升樣品中的細菌數量=平板上菌落數的平均值÷體積×稀釋倍數=（160+175+187）÷3×104÷0.1=1.74×107個。

（4）由于兩個或者多個細胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落，所以用上述方法統計出的菌落數往往比樣品中活菌的實際數目少。