Question

【題目】測定水樣是否符合飲用水衛生標準，常用濾膜法測定大腸桿菌的數目。濾膜法的大致流程：用濾膜過濾待測水樣→水樣中的細菌留在濾膜上→將濾膜轉移到伊紅美藍的培養基(EMB 培養基)上培養→統計菌落數目。流程示意圖如下圖所示。其中，指示劑伊紅美藍可使大腸桿菌菌落呈現紫黑色。請據圖回答問題：

（1）過濾待測水樣需要用到濾杯、濾膜和濾瓶，均需要進行滅菌處理，與過濾有關的操作都要在超凈臺上酒精燈火陷旁進行。待測水樣過濾完之后，還有部分細菌吸附在濾杯杯壁上，將這部分細菌也盡可能集中到濾膜上的操作為：在無菌條件下用______沖洗濾杯，并再次_______。

（2）將完成過濾之后的濾膜緊貼在EMB培養基上，這屬于微生物培養中的______操作。從物理狀態角度分析，EMB 培養基屬于_____培養基，為檢測培養基滅菌是否徹底，對于固體培養基應采用的檢測方法是________________。

（3）某生物興趣小組的某同學嘗試按照上述方法進行測定，無菌操作下將 10mL待測水樣加入到 90mL無菌水中，稀釋后的菌液通過濾膜法測得 EMB 培養基上的菌落數平均為84，紫黑色菌落數平均為21，則推測1L待測水樣中的大腸桿菌數目為____。

（4）在配制尿素培養基的過程中，由于尿素具有______特性，導致其無法使用高壓蒸汽滅菌法滅菌，通常通過選用合適_____的濾膜代替G6玻璃砂漏斗，也可達到去除尿素溶液中雜菌的目的。培養后的菌種通常暫時保存在4度的冰箱中，是因為此溫度下菌既停止生長，又短時間內不會死亡。

Answer 1

【答案】無菌水 過濾 接種 固體 將未接種的培養基在恒溫箱中培養一段時間，觀察培養基上是否有菌落產生 2100 加熱會分解 孔徑

【解析】

1、血細胞計數板法：用計數板計數，缺點是不能區分死菌和活菌。

2、稀釋涂布平板法：①常用來統計樣品中活菌的數目；②統計的菌落數往往比活菌的實際數目低；③樣品的稀釋程度將直接影響平板上生長的菌落數目，通常選用菌落數在30~300、適用于計數的平板進行計數，菌落太少或太多都會使計數準確性變差。

3、濾膜法：當樣品中菌數很低時，可將一定體積的湖水、海水或飲用水等樣品通過濾膜過濾，通過培養觀察形成的菌落敫來推算樣品中的活菌數。例如，測定飲用水中大腸桿菌的數目：將已知體積的水過濾后，將濾膜放在伊紅美藍培養基上培養，在該培養基上，大腸桿

菌的菌落呈現黑色，可根據培養基上黑色菌落的數目，計算出水樣中大腸桿菌的數目，此法統計的是樣品中活菌的數目。

（1）過濾待測水樣需要用到濾杯、濾膜和濾瓶，這些實驗儀器都需要經過滅菌處理，與過濾有關的操作都要在酒精燈火焰旁進行，防止雜菌的污染。待測水樣過濾完之后，還有部分細菌吸附在濾杯杯壁上，此時可以在無菌條件下，用無菌水沖洗濾杯，再次過濾，將這部分細菌也盡可能集中到濾膜上。

（2）將完成過濾之后的濾膜緊貼在EMB培養基上，屬于微生物培養中的接種操作。從物理狀態角度分析，EMB培養基中含有瓊脂，故屬于固體培養基。為檢測培養基滅菌是否徹底，將未接種的培養基在恒溫箱中培養一段時間，觀察培養基上是否有菌落產生，如果有菌落產生，則滅菌不徹底，培養基配制不合格。

（3）無菌操作下將90ml無菌水加入到10ml待測水樣中，這樣就將待測水樣稀釋了10倍；根據大腸桿菌鑒定的原理可知，黑色菌落為大腸桿菌，因此1升待測水樣中的大腸桿菌數目=21×（1000÷10）=2100個。

（4）在配制尿素培養基的過程中，由于尿素具有加熱分解的特性，導致其無法使用高壓蒸汽滅菌法滅菌，通常通過選用合適孔徑的濾膜代替G6玻璃砂漏斗，也可達到去除尿素溶液中雜菌的目的。